Biosense微生物动态监测系统实验操作步骤——脓肿分枝杆菌的生长曲线
脓肿分枝杆菌是快速生长分枝杆菌(RGM)中最耐药的细菌之一。它对目前使用的抗生素(包括几乎所有抗结核药物)具有天然耐药性，这严重复杂化并限制了治疗方案。脓肿分枝杆菌被认为是囊性纤维化患者的重要病原体。细菌素可能是对抗这种感染的替代治疗方案，以克服细菌耐药性的问题。与经典的肉汤稀释法相比，oCelloScope具有速度快的优点。它可以提供图像和视频，并且可以快速筛选抗菌药物的活性。研究人员可以在6小时内检测到脓肿分枝杆菌的生长，而不是传统的在肉汤培养基中连续稀释3-5天。
实验方法
1、将oCelloScope置于37°C的标准实验室培养箱中
2、在37°C的7H10琼脂培养基中培养脓疡杆菌参考株或临床分离株3-5天
3、根据OD600测量值，将McFarland细菌悬浮液配制为0.5。将悬液稀释1/10到7H9培养基中(添加0.5%甘油和10%OADC)。
4、将细菌悬液添加到含有细菌素的96孔板中
5、将装有细菌悬浮液的96孔板导入oCelloScope设备中，拧紧并关闭仪器盖。建议添加到每个孔的菌悬液的总容积为200μL。
6、使用oCelloScope的生长动力学模块进行AST分析。
7、通过单击主窗口左上角的“New job”按钮，配置UniExplorer软件进行延时分析。
8、为新作业命名，然后按以下顺序双击(或拖动)图标，从左侧列表中选择采集模块:(i)“采集”(用于记录新图像数据)和(ii)“生长动力学分析”(用于监测细菌生长/生长抑制的时间)。按“下一个”。
9、通过左键单击从仪器列表中选择要使用的仪器，让UniExplorer软件识别oCelloScope仪器。按“Next”继续实验设置。
10、选择96孔板
11、通过选择获取的图像数量(“重复次数”)和两个连续图像之间的时间间隔(“重复间隔”)来调整分析时间。例如，通过选择“重复次数”=48和“重复间隔时间”=00:30:00,oCelloScope将在24小时内每30分钟拍摄一次图像，第一张图像在t=0时拍摄。
12、用光标选择并启用应该包含在分析中的孔。启用的孔显示为蓝色。
13、按“开始”键开始实验
14、实时生长/生长抑制曲线以及图像数据和延时视频可以在“当前扫描”选项卡中检查和比较实验期间。
图1.Biosense微生物动态监测系统
实验结果
详细介绍了使用Biosense微生物动监测系统在医院环境中测试，由初创公司Syngulon(http://syngulon.be)提供的对脓肿分枝杆菌的细菌素和抗菌肽的抗菌活性，并实时监测生长动力学分析的方案。
图2、采用Biosense微生物动态监测系统中的BCA归一化算法测量脓肿分枝杆菌生长曲线(三份)
图3、Biosense微生物动态监测系统捕获的7h30分钟时刻对应的脓肿分枝杆菌(粗略表型)生长延时图(典型蛇形索成像)
图4、Biosense微生物动态监测系统测试的脓肿分枝杆菌生长曲线
相关新闻推荐
2、不同条件下裂片石莼水培液的组成成分对耐药弧菌株的抑菌作用（二）
3、湖泊中细菌的多样性、与湖泊藻类爆发的关系及在湖泊污染治理中的应用