BioSense微生物快速立体计数仪

丹麦BioSense公司µCount3D微生物立体计数仪能在8分钟内对液体样品中纯培养的细菌、真菌孢子、酵母、微藻进行计数。

µCount3D微生物立体计数仪，使用带有三个样品室的测量板，Count3D软件展示总细菌/mL或真菌孢子/mL，并记录图像。

丹麦BioSense公司拥有全世界领先的倾斜倒置成像技术和机器视觉算法，专有的FluidScope倾斜摄像头扫描技术提供精确和可重复的结果。

FluidScope倾斜摄像头扫描技术原理：当拍摄图像时，拍摄的是一个体积而不是一个平面。每个图像的高度为150 µm，由于图像重叠，我们可以创建垂直和水平的Z堆栈。此体积中存在的所有对象都被聚焦捕获。

技术参数

1 样品种类：细菌、真菌、酵母、藻类。

2 仪器尺寸：长20cm×宽10cm×高20cm。

3 样品大小：0.5µm以上。

4 可计数范围：1×10⁴ – 1×10⁷ 。

5 运行时间：8 min。

6 实验数据格式：个/mL、图片、PDF报告。

7 样品容器：BioSense三格样品板。

8 可自设算法。

真菌孢子和细菌的计数

为了计数真菌孢子，我们使用深度学习算法来识别和计数样本中的孢子。计数算法广泛应用于我们的oCelloScope™活细胞成像技术，并用于医学、农作物科学和食品研发。我们支持一系列孢子和形态，甚至为科学家提供注释工具来创建自己的算法。

对于细菌计数，我们使用体积成像法来计数整个体积中存在的细菌。细菌沉降非常缓慢，并且存在于整个成像体积中。因此我们可以捕获所有细菌，可测量细菌小至0.5 µm像素。

1 µm质控微珠的线性响应

图1 用µCount3D立体计数仪测量2倍稀释的1 µm质控微珠的线性响应，R²=0.9992。线性响应是评估计数系统性能的关键参数，它指的是计数系统在特定浓度范围内产生与实际数量成正比的结果的能力。

图1左图显示整个范围1.6×10⁴–2×10⁶，图1右图显示缩放范围1.6×10⁴-3×10⁵。

芽孢杆菌孢子的线性响应

图2 使用µCount3D立体计数仪测量2倍稀释的3种不同芽孢杆菌孢子（枯草芽孢杆菌，2种平行芽孢杆菌菌株）的商业杀线虫剂产品的线性响应，R²=0.9972。

图2左图显示整个范围2.3×10⁴-1.2×10⁷，图2右图显示缩放范围2.3×10⁴到7.5×10⁵。

µCount3D立体计数仪与琼脂上的菌落计数的对比

我们建立了一个验证测试，使用µCount3D立体计数仪和琼脂菌落培养计数来测量大肠杆菌。为了精确菌落计数，我们使用IntuGrow快速CFU/mL测定法（IntuBio，Farum，Denmark，www.IntuBio.dk）。

方案：大肠杆菌（K12）在TSB中生长过夜。使用0.2 µm过滤器对10 mL 0.9%NaCl缓冲液进行无菌过滤，以去除缓冲液中的颗粒。一夜之间，大肠杆菌在Eppendorf管中稀释100倍，达到所需的起始浓度约1×10⁷。使用µCassetteB，65 µL/室（BioSense Solutions，Farum，Denmark）测量大肠杆菌浓度，一式三份。使用µCount3D算法：细菌。实验起始浓度测量为6.97×10⁶，样品离心管标记为“1”。对于IntuGrow平板计数，将试管“1”进一步稀释，以达到预期的20-100个菌落计数。对于平板计数，将10 µL稀释的样品“1”用TSA在迷你琼脂盘（丹麦法鲁姆BioSense Solutions）上一式三份。将迷你琼脂盘放置在12孔微量滴定板中，使用oCelloScope™对琼脂表面进行成像。使用IntuGrow软件（IntuBio，Farum，Denmark）对新出现的菌落进行计数。从原始试管“1”中，制备了含有500 µL 0.9%NaCl和500 µL样品的2倍稀释系列。将带试管的架子置于寒冷条件下，以减少大肠杆菌的新分裂。总共进行了8×2倍的稀释。重复试管“1”的程序，对所有样品进行计数，一式三份。

结论：µCount3D立体计数仪和平板计数之间的比较测试显示出非常好的相关性。实验进行了4次，相关性相等。在所有实验中，平板计数略高于µCount3D立体计数仪的计数。我们推测这种差异可能是由移液引起的，因为µCount3D立体计数仪使用的样品直接来自稀释样品管，而用于平板计数的样品会进一步稀释100-1000倍，并从中接种10 µL琼脂，所以移液管的不准确性可能是造成差异的原因。

图3， TSB中过夜2倍稀释的大肠杆菌培养物。蓝线表示使用µCount3D立体计数仪的自动计数。橙色线表示使用琼脂平板测定法在TSA上的菌落计数。图3线性响应为R²=0.987。

图4， µCount3D立体计数仪计数结果与TSA菌落平板计数结果的相关性。与图3中使用的数据相同。图4线性响应为R²=0.991。

图5， µCount3D立体计数仪的软件视图，显示了实验中使用的大肠杆菌的三孔读数。