基于ELISA和细菌生长曲线应用的结合定量检测肠炎沙门氏菌（二）
2结果
2.1 vidas检测值与菌浓度关系及验证
本文发现，Vidas测试值与沙门氏菌浓度(对数值)函数关系为y=0.102x3-0.648x2+1.563x+5.826，相关系数R2=0.994，X值适应范围0.2～3.8，对应沙门氏菌浓度范围约106～108cfu/ml，即vidas对沙门氏菌检测底限约在106cfu/ml，而菌浓度超过108cfu/ml会出现x值钝化状态，可能与抗原抗体结合饱和有关。取经过一系列稀释梯度的肠炎沙门氏菌液6管分别对其进行vidas检测和使用3 M测试片计数进行了验证试验。通过验证发现，vidas检测计算值与测试片所得值相对误差最小0.13%，最大2.50%，平均相对误差1.33%。见图1、表1。
2.2肠炎沙门氏菌在TTB和SC中生长曲线的建立
我们比较肠炎沙门氏菌若干梯度在sc增菌液36℃培养生长曲线发现，生长曲线对数期的中后期培养8～10 h是进行vidas检测较好时机，而vidas最佳检测区间在沙门氏菌浓度在106cfu/ml到108cfu/ml，这时各梯度生长曲线区分度分较好，进入平稳期曲线则近于粘合。横坐标为培养时间(h)纵坐标我们发现肠炎沙门氏菌在TTB培养基中生长曲线的对数期要短些，培养12 h后基本进入稳定期。其中接种1 cfu/ml为例经过2 h的调整期进入对数期，经过约14 h后进入稳定期，不同接种浓度沙门氏菌在调整期都是2 h，不同的是浓度越高对数期时间越短更早的进入稳定期。见图2、3。
图1 Vidas测试值横坐标与菌浓度纵坐标(取对数值)函数关系
表1验证试验中通过vidas检测得到数值代入公式计算值与实测值对比分析
图2肠炎沙门氏菌若干稀释梯度在SC增菌液36度培养生长曲线
图3肠炎沙门氏菌若干稀释梯度在TTB增菌液42度培养生长曲线
2.3通过生长曲线对人为污染样品的检测本文发现，在SC增菌液中，冷鲜猪肉模拟样品相对误差较大，其余样本误差均在10%以内;在TTB增菌液中，冷鲜猪肉模拟样品相对误差在28.6%，而其他样本误差均在10.0%以内。见表2～5。
2.4干扰实验本文发现，干扰试验中对含有干扰菌的样品检测与不含干扰菌的检测误差平均值为0.17，相对误差平均值在11.0%。见表6。
表2加入系列浓度沙门氏菌的人为污染样品在sc增菌液中增菌9 h后vidas检测
表3实际添加肠炎沙门氏浓度和检测值比较分析%
表6第1组样品和第2组添加干扰菌的样品的增菌液初始沙门氏菌浓度估算cfu/ml
3讨论
沙门氏菌是影响食品安全的主要微生物之一。沙门氏菌病是公共卫生学上重要的人畜共患病之一，沙门氏菌引起的食物中毒在各国细菌性食物中毒中常列榜首，现有规定中食品中不得检出沙门氏菌［6，7］。但是目前食品中沙门氏菌的定量检测方法相对较少，且存在诸多的不足。本课题对鲜肉及制品中肠炎沙门氏菌定量检测研究，基于沙门氏菌在选择性增菌液中的生长曲线。选择性增菌液对干扰菌会有一定的抑制作用，同时还能促进沙门氏菌的生长，这样能够更好的对目标菌的分离。通过生长曲线可以看出，无论接种浓度大小，都经历2 h停滞期(适应期)然后进入对数生长期，对数生长期随着接种菌浓度增加而缩短，进过培养9～16 h不同接种浓度沙门氏菌基本上都到达平稳期菌含量在(5～8)×108cfu/ml。在对数生长期不同接种浓度沙门氏菌形成斜率基本相同的平行斜线，如在SC增菌液中对数期生长曲线斜率在0.71～0.73。对数生长期某一定时间不同接种浓度的沙门氏菌增殖达到浓度形成一定斜率的直线，如SC增菌中培养9 h时得出方程y=1.028X-5.202相关系数R2=0.995，根据此方程和此时增菌液沙门氏菌浓度x可以计算出增菌液初始接种浓度。本文中使用vidas对增菌液浓度检测根据检测值与菌浓度数学模型y=0.102x3-0.648x2+1.563x+5.826相关系数R2=0.994(0.2＜x＜3.8)因为vidas检测底限在106cfu/ml此时检测值接近0.2，此方法在10 h时检测限在2 cfu/ml附近。但是如果使用荧光定量PCR检出限100 cfu/ml，能够定量到1 cfu/100 ml［8-10］。
本方法是对鲜肉类及制品直接使用SC或TTB增菌根据标准SN/T0040-1992出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)计数检验方法。本使用肠炎沙门氏菌为模型进行的研究，如果扩展到其他类型沙门氏菌还需要具体探索其他菌在SC或TTB中的生长模型。同时，本文探索基于ELISA-生长曲线原理来对沙门氏菌定量研究的方法，也可扩展到对其他菌的定量研究。
基于ELISA和细菌生长曲线应用的结合定量检测肠炎沙门氏菌（一）
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