烟草黑胫病菌对氟吗啉与甲霜灵的药敏性分析（二）
1.5复配药剂对解淀粉芽孢杆菌生长速率的影响
利用微生物生长曲线测定仪测定不同浓度的复配杀菌剂对解淀粉芽孢杆菌ZY-9-13菌落生长的影响。将解淀粉芽孢杆菌ZY-9-13在营养肉汤培养液中摇培36 h(30℃，120 r/min)，得到ZY-9-13菌悬液，通过涂板计数法测定菌液浓度为1010 cfu/mL。再取500μL菌液加入到50 mL培养液中摇培6 h(30℃，120 r/min)后备用。配置不同浓度的氟吗啉与甲霜灵复配杀菌剂，用二甲基亚砜稀释药液，使终浓度为6.0μg/mL(约20倍EC50浓度)、3.0μg/mL(约10倍EC50浓度)和0.3μg/mL。在100孔蜂窝板中，每孔加入250 mL营养肉汤培养液、50μL菌液和3μL药液(空白对照中加入3μL二甲基亚砜)，每个处理重复5次。将蜂窝板放入Bioscreen C测定仪(芬兰Oy Growth Curves Ab公司)中进行培养，温度为37℃，每30 min测定一次菌液在600 nm处的吸光值(OD值)。振荡培养126 h后，比较加药处理与空白对照对菌液生长的影响。
1.6化学复配药剂与ZY-9-13协同增效评价方法
联合毒力测定结果，按氟吗啉:甲霜灵为1:10的比例进行复配，使复配杀菌剂最终供试浓度为0、0.1、0.3、0.5、1.0和3.0μg/mL，ZY-9-13菌悬液的浓度为1010 cfu/mL，复配杀菌剂与ZY-9-13混合物的浓度依次为0、0.1、0.3、0.5、1.0、3.0μg/mL+1010 cfu/mL。每药剂处理重复3次，以无药处理为对照，采用十字交叉法测量菌落直径，计算各浓度对烟草黑胫病菌的抑制率。采用Abbott数学模型计算复配杀菌剂与生防菌混合使用对病原菌的预期效果。
式中：E为两种药剂混合后的理论抑制率，%；X、Y分别为药剂单独使用时的实际抑制率，%。
将理论抑制率与实际抑制率相比较，如果理论值＜实际值，表示两者在复配时存在增效作用；若理论值=实际值，表示两者为相加作用；若理论值＞实际值，则表示两者复配时存在拮抗作用。
2结果
2.1烟草黑胫病菌对氟吗啉的敏感性检测
从河南省11个地区共分离获得71株烟草黑胫病菌，药剂敏感性结果(表1)表明，氟吗啉对所有供试菌株的EC50值在0.428 5~0.760 8μg/mL，最大的EC50值与最小的EC50值之间相差1.78倍，平均EC50值为0.588 4μg/mL，表明来自河南省不同地区的烟草黑胫病菌对氟吗啉的敏感性差异不大。其中，平均EC50值最低的菌株来自卢氏，为0.498 7μg/mL，平均EC50值最高的菌株来自汝阳，为0.666 1μg/mL，来自其他地区菌株的EC50值居于两者之间。71株菌株对氟吗啉的敏感性频率分布呈连续单峰曲线(图1)，表明供试菌株对氟吗啉敏感，未出现抗药性亚群体。
图1 71株烟草黑胫病菌对氟吗啉的敏感基线
表1河南省不同地区烟草黑胫病菌对氟吗啉的敏感性比较
2.2氟吗啉与甲霜灵二元复配对烟草黑胫病菌的联合毒力评价
分别测定了氟吗啉与甲霜灵单剂及二者按不同比例复配后对烟草黑胫病菌的毒力作用，结果如表2所示。氟吗啉与甲霜灵按照不同比例复配后的12个药剂均能有效抑制烟草黑胫病菌的菌丝生长，EC50值为0.398 7~0.935 2μg/mL，大于甲霜灵单剂的EC50值0.379 3μg/mL，但小于氟吗啉单剂的EC50值1.179 9μg/mL。
表2氟吗啉与甲霜灵复配对烟草黑胫病菌的毒力
根据以上单剂和复配药剂对烟草黑胫病的抑制率，用Wadley法评价氟吗啉与甲霜灵复配药剂的联合作用，结果见表3。12个复配药剂均具有相加作用，增效系数介于0.665 2~1.013 8之间，其中氟吗啉与甲霜灵的质量比为1:10或3:20时，增效系数分别为1.013 8和1.012 7，加和效果最为明显。综合考虑联合毒力评价结果、经济成本等因素，选择1:10复配比例为最佳。
表3氟吗啉与甲霜灵复配对烟草黑胫病菌的联合毒力
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