钝叶独行菜中抗癌成分的分离及制备方法
钝叶独行菜多生长于海拔1600m～1800m的草地、田边、戈壁滩、平地和山坡，在我国西北地区分布较广，其中以甘肃、青海、新疆分布最为广泛，中亚和蒙古亦有分布。
独行菜属植物化学成分主要是：生物碱、黄酮类、挥发油、芥子油苷、酚酸类、脂肪酸、木质素等。
目前并没有针对钝叶独行菜用于抗癌成分的研究，也没有公开具体的独行菜中抗癌成分的分离制备方法。
针对现有技术的不足，技术人员研发了一种钝叶独行菜中抗癌成分的分离及制备方法，以解决上述的问题。
钝叶独行菜中抗癌成分的分离及制备方法包括以下步骤：
步骤一、准备原料，钝叶独行菜干样研磨成粉末备用；
步骤二、回流提取，按重量称取钝叶独行菜粉末，通过95％乙醇进行超声回流提取，得到浸膏；
步骤三、减压浓缩，将步骤二的浸膏经乙酸乙酯萃取，分别收集乙酸乙酯相和水相，再对各相进行减压浓缩，挥干溶剂，得到乙酸乙酯部位浸膏和水相部位浸膏；
步骤四、梯度洗脱，将水相部位的浸膏用纯水超声至充分溶解后，以1BV/h流速上样，充分吸附12h后，依次用纯水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇、95％乙醇以0.5BV/h洗脱，收集洗脱液，减压浓缩各洗脱液，挥干溶剂后，得到6个组分；用95％乙醇将乙酸乙酯部位浸膏溶解后与相等质量的硅胶搅拌，干法装柱，在柱高达到要求后，将制好的硅胶样品均匀放入玻璃层析柱内，依次用氯仿、氯仿-甲醇(50:1)、氯仿-甲醇(30:1)、氯仿-甲醇(20:1)、氯仿-甲醇(10:1)、氯仿-甲醇(5:1)、氯仿-甲醇(2:1)、甲醇，进行梯度洗脱，分段收集，收集浓缩液后挥干溶剂，得到18个组分；
步骤五、活性成分筛选分离，通过癌细胞生长曲线测定；组分体外抗癌细胞活性筛选，确定活性组分钝叶独行菜乙醇提取物、乙酸乙酯部位、氯仿-甲醇(50:1)I、氯仿-甲醇(50:1)II；从活性组分中分离出香草酸、丁香酸、对羟基苯甲酸乙酯和异香草酸。
水相部位的浸膏经大孔树脂乙醇-水梯度洗脱后共获得6个组分，分别是纯水组分、20％乙醇组分、40％乙醇组分、60％乙醇组分、80％乙醇组分、95％乙醇组分；
乙酸乙酯部位浸膏过硅胶经氯仿-甲醇梯度洗脱后共获得18个组分，分别是氯仿-甲醇(50:1)I组分、氯仿-甲醇(50:1)II组分、氯仿-甲醇(30:1)I组分、氯仿-甲醇(30:1)II组分、氯仿-甲醇(30:1)III组分、氯仿-甲醇(20:1)I组分、氯仿-甲醇(20:1)II组分、氯仿-甲醇(20:1)III组分、氯仿-甲醇(10:1)I组分、氯仿-甲醇(10:1)II组分、氯仿-甲醇(10:1)III组分、氯仿-甲醇(5:1)I组分、氯仿-甲醇(5:1)II组分、氯仿-甲醇(5:1)III组分、氯仿-甲醇(2:1)I组分、氯仿-甲醇(2:1)II组分、甲醇I组分、甲醇II组分。
小结
钝叶独行菜中抗癌成分香草酸、丁香酸、对羟基苯甲酸乙酯和异香草酸，可抑制癌细胞生长，通过分离制备，得到的化合物纯度较高。