亚胺培南&盐酸小檗碱可提高对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌抑制作用——摘要、材料与方法
摘要：目的评价亚胺培南、盐酸小檗碱两种药物联合使用对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CPA)体外抗菌活性产生的影响，探讨两种联合用药方案可行性，为抗菌药物联合使用合理性进一步提高可靠参考依据。方法收集2016年2月～2017年5月本院临床分离的80株CPA，采用肉汤稀释法实施亚胺培南、盐酸小檗碱耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌最小抑菌浓度(MIC)检测;采用棋盘稀释法实施亚胺培南联合盐酸小檗碱对CPA的MIC，将联合指数(FIC)计算出来。结果单独使用盐酸小檗碱、亚胺培南时，两种药物对CPA的MIC的均值分别为261.00、8.75μg/mL;两药联合使用后，亚胺培南、盐酸小檗碱对CPA的MIC值均有明显减少，均值分别下降为8.11、4.48μg/mL;两药联用时，对88.42%的50株CPA表现为相加抗菌作用，对6.56%CPA表现为协同抗菌作用，对5.02%CPA表现出无拮抗作用。结论亚胺培南、盐酸小檗碱联合使用时，二者主要表现为协同作用，表明联合能够有效提高两种药物各自对CPA的抗菌敏感性，因此将该方案应用于CPA感染治疗可能获得更理想效果。
铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa）又可称为绿脓杆菌，为广泛分布自然界中的一类重要细菌之一，属于较为常见的一种条件致病菌，同时也是导致院内感染发生的一类重要致病菌。该病菌感染可会引起败血症、呼吸道感染、尿路感染、伤口感染等。临床数据显示，近年来，铜绿假单胞菌的分离及耐药率均表现出明显递增趋势，且对碳青霉稀类耐药率有明显升高，有广泛耐药菌株出现，这大大增加了疾病临床治疗难度，影响疾病治疗效果及预后。因此，加强对该类细菌耐药情况进行深入研究具有重要临床意义。本研究主要探讨同时使用盐酸小檗碱、亚胺培南两种药物对CPA体外抗菌活性产生的作用，现做如下报道。
1资料与方法
1.1一般材料
选取2016年2月～2017年5月本院临床分离的80株CPA，实施法国梅里埃VITEK2-CompactT检测，同时实施Hodge实验，根据检测及实验结果选取50株耐碳氢酶烯类铜绿假单胞菌。质控菌株27853由中国卫生部临检中心提供。研究所用抗菌药物：亚胺培南，纯度：98%，批号：160421，规格：5g/支；盐酸小檗碱，纯度：98%，批号：160528，规格；1g/支。两种药物均为上海源叶生物科技有限公司提供。
1.2方法
1.2.1制备菌悬液
实施菌种均实施复融、转种以及分离培养，于相同平板取1～2个性状相似的菌落，将其接种至LB液体培养基内进行10～12h的培养。使用RPMI1640液体培养基将LB培养液密度调节为2～6×108CFU/L菌悬液。实施实验时用RP-MI1640培养基将LB培养液稀释至100倍，获得接种菌悬液（密度为2～6×108CFU/L）。
1.2.2配制药物浓度
使用无菌蒸馏水分别将亚胺培南、盐酸小檗碱干粉碱配成256μg/mL、2048μg/mL原液，再实施NCCLS抗生素药敏微量稀释。亚胺培南最终浓度控制为0.125～128μg/mL。
1.2.3两种药物单独药敏试验使用NCCLS微量倍比稀释实施亚胺培南、盐酸小檗碱稀释后，在孵育箱（温度：37℃）中放置18～24h后观察结果。
1.2.4盐酸小檗碱交叉联合抗真菌药物药敏试验
选用棋盘微量稀释法检实施药物同时应用作用。采用稀释度为9个，最高浓度使其MIC的4倍，实施依次倍比稀释，具体倍比浓度为1、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256倍。在Biosense系统的96孔培养板上按照纵、横两列联合两种药物稀释。接种菌量选择为1×105CFU/mL，将铜绿假单胞菌放置于孵育箱（温度：37℃）中，放置时间为18～24h，然后仔细观察细菌的生长情况。计算出部分抑菌浓度指数（FIC），并以该值为根据对联合药敏试验效果进行评估。
1.2.5单药最低抑制浓度（MIC）值测定
MIC值通过微量肉汤倍比稀释法检测。制备单药孔板：去96孔微型平板，在1～12各孔加入100μL肉汤，首列各孔加入100μL盐酸小檗碱药液（128μg/mL），实施倍比稀释，使第1～11孔盐酸小檗碱浓度稀释至0.065～64μg/mL。在1～12各孔加入100μL已配置好菌悬液，使第1～11孔盐酸小檗碱浓度稀释为0.03～32μg/mL，将12孔作为阴性对照。按照如上方法实施亚胺培南单药孔板制备，亚胺培南最终浓度控制为0.25～256μg/mL。放置于温度为（35±2）℃温箱中进行18～24h培养，然后观察结果，并记录MIC。
1.2.6计算FIC及效果评估
MIC甲药联合/MIC甲药单用+MIC乙药联合/MIC=FIC。乙药单用抗菌效果判定：（1）两药协同作用：FIC指数≤0.5；（2）两药相加作用：FIC指数≤1；（3）两药无关作用：1＜FIC指数≤2；（4）两药为拮抗作用：FIC指数＞2。
1.3统计学分析
试验研究数据资料均通过SPSS 19.0软件进行统计学分析。MIC值等计量数据对比实施t检验处理，选用（±s）表示。以P＜0.05表示相互比较差异有统计学意义。
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