藜麦和蓝靛果酵母菌株筛选、培养、计数及混菌液态发酵工艺优化（二）
1.2.3酵母菌筛选及发酵条件确定
1.2.3.1发酵菌种及时间选择
以藜麦-蓝靛果复合发酵液中SOD活力和活菌数为双指标，在初始装瓶量30 mL、pH5.0、接种量为0.20%条件下，接种BA、DE、YE和Sce菌液于藜麦-蓝靛果复合清汁中，30℃下分别发酵8、16、24、32、40 h。
1.2.3.2接种量选择
以藜麦-蓝靛果复合发酵液中SOD活力和活菌数为双指标，在初始装瓶量30 mL、pH5.0条件下，接种0.15%、0.20%、0.25%、0.30%、0.35%酵母菌。
1.2.3.3装瓶量选择
以藜麦-蓝靛果复合发酵液中SOD活力和活菌数为双指标，在初始装瓶量30 mL、pH5.0、接种量为0.20%条件下，100 mL锥形瓶中分别装10、20、30、40、50 mL藜麦-蓝靛果复合清汁后接种酵母菌，发酵16 h。
1.2.4活菌数的测定
酵母菌采用血球计数板法计数；乳酸菌采用平板法计数。
1.2.5 SOD活力的测定
按照超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒说明书方法测定。
1.2.6乳酸菌筛选及发酵条件确定
1.2.6.1乳酸菌生长曲线及产酸性能的测定
将乳酸菌在其最适条件下培养，每隔4 h取样，使用酶标仪测量其OD值绘制生长曲线，使用精密pH计测定pH绘制产酸曲线。
1.2.6.2发酵菌种及时间选择
以藜麦-蓝靛果复合发酵液中活菌数和SOD活力为双指标，在初始pH5.0、发酵温度37℃条件下，接种量为3%的LA、LP、LR和S菌液于藜麦-蓝靛果复合清汁中，37℃下分别发酵8、16、24、32、40 h。
1.2.6.3接种量选择
以藜麦-蓝靛果复合发酵液中SOD活力和活菌数为双指标，在初始pH5.0、发酵温度37℃条件下，分别接种1%、2%、3%、4%、5%菌液，L1、L2、L3发酵24 h、L4发酵16 h。
1.2.6.4复配比例选择
以藜麦-蓝靛果复合发酵液中SOD活力和活菌数为双指标，在初始pH5.0、发酵温度37℃条件下，将上述两种最优乳酸菌按1:3、1:2、1:1、2:1、3:1比例接种，分别发酵24 h。
1.2.7复配菌种发酵藜麦-蓝靛果复合发酵液工艺优化
1.2.7.1单因素实验
藜麦-蓝靛果复合清汁初始pH5.0，原料复配比例为1:1，添加6%白砂糖，灭菌后先接种0.02%酵母菌30℃预发酵16 h，再接种2%复配乳酸菌37℃发酵24 h，测定藜麦-蓝靛果复合发酵液SOD活力和GABA含量。固定其它条件，分别考察初始pH（3.5、4.0、4.5、5.0、5.5）、发酵温度（26.5、30.0、33.5、37.0、40.5℃）、原料复配比例（1:5、1:3、1:1、3:1、5:1）、白糖添加量（4%、6%、8%、10%、12%）对藜麦-蓝靛果复合发酵液SOD活力、GABA含量的影响。
1.2.7.2响应面试验设计
利用Design-Expert 10软件中Box-Behnken模型，以藜麦-蓝靛果复合发酵液SOD活力为响应值，进行白糖添加量、复配比例（藜麦清汁:蓝靛果果汁）、接种量、发酵温度4个单因素对藜麦-蓝靛果复合发酵液SOD活力的响应面分析，优化发酵工艺参数。试验因素水平如表1所示。
表1 Box-Behnken试验设计因素及水平
1.2.8 GABA含量测定
参考汤彩云等的方法绘制标准曲线，藜麦-蓝靛果复合发酵液的GABA质量浓度测定方法与标准品相同，将测得的吸光度值带入标准曲线方程y=2.1796x+0.0553，R2=0.9995，求出GABA的质量浓度，即为藜麦-蓝靛果复合发酵液的GABA含量。
1.3数据处理
所有试验重复3次，采用SPSS 25进行单因素方差分析，P<0.05具有统计学意义，Design Expert 10中Box-Behnken模型进行响应面试验设计及分析、GraphPad Prism 9软件作图。
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