禾谷镰孢菌和腐皮镰刀菌实时监测及生物学活性观察
近年来,禾谷镰孢菌感染引起的赤霉病在世界范围内频繁爆发,造成严重的产量和经济损失,该病原菌还会产生大量真菌毒素污染粮食,给人畜健康构成严重威胁。由于禾谷镰孢菌侵染作物的毒力因子、分子致病机制尚不清楚,对于禾谷镰孢菌的防治手段十分有限,主要集中在化学防治,还没有完全有效的生物防治方法可供使用。
禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)是引起许多农作物严重病害,包括小麦赤霉病、冠腐病和幼苗枯萎病,以及玉米赤霉茎腐病和穗腐病的主要病原之一。植物病原真菌禾谷镰孢菌在侵染小麦期间,特异诱导次生代谢基因簇fg3_54表达,合成线性非核糖体八肽-镰孢菌素A(fusaoctaxin A),赋予镰孢菌菌丝在小麦组织内从一个细胞穿壁入侵到旁邻细胞扩展的能力。
研究内容:
镰孢菌素A的生物学活性观察:用oCelloscope微生物生长动态监测系统来实时监测禾谷镰孢菌和腐皮镰刀菌,在暴露于0-100µM浓度化学合成的镰孢菌素A时的生长情况:在96孔板中加入200µL无菌过滤YPG培养基、5000个禾谷镰孢菌孢子和0µM、12.5µM、25µM、50µM、100µM的镰孢菌素A,在25℃条件下,20分钟间隔,180次重复,监测生长(见下图)。
图八肽镰孢菌素A、五肽镰孢菌素A、三肽镰孢菌素A对镰孢菌没有表型效应。所有实验重复3次,基准尺200µm。a、e:0.5%乙醇对照;b、f:100µM八肽镰孢菌素A;c、g:100µM五肽镰孢菌素A;d、h:100µM三肽镰孢菌素A。
结论
八肽镰孢菌素A是由禾谷镰孢菌中的两个真菌非核糖体肽合成酶串联合成的。在具有肽酶活性的簇特异性ABC转运蛋白的转运过程中,八肽镰刀菌肽A被ABC转运蛋白切割为三肽镰孢菌素A和五肽镰孢菌素A。
点评
oCelloscope微生物生长动态监测系统可以动态、实时地观察、拍照、摄像假丝酵母和镰孢菌等杆状、丝状微生物的动态生长和测量生长曲线,并能同时计数孢子与菌丝。可以动态、实时地观察、拍照、摄像真菌的菌丝、孢子的生长、发育过程,并设计不同的实验环境条件来观察、研究其菌丝和孢子的生长和发育机理。这个创新技术设备给真菌类微生物研究者提供了极大的便利。