金黄色葡萄球菌生长曲线的测定步骤
葡萄球菌是可以在多个平面上分裂，并形成不规则簇的球形革兰氏阳性细菌。它们存在于所有温血动物的上呼吸道和其他上皮表面。在20个葡萄球菌种中，具有兽医学意义的约有4种：金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌和施氏葡萄球菌凝结亚种。
金黄色葡萄球菌是一种常见的人和几种动物的化脓性微生物；中间葡萄球菌是一种狗的主要化脓性细菌；已在几个物种发现了猪葡萄球菌，引起猪渗出性上皮炎，有时引起牛的乳腺炎；施氏葡萄球菌凝血亚种（和中间葡萄球菌），有时与狗的外耳炎相关。下面一起来了解下金黄色葡萄球菌是如何分离出来的。
金黄色葡萄球菌生长曲线的测定：
将-80℃保存的金黄色葡萄球菌甘油冻存液，按1︰100的比例接种到5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，37℃、200rpm/min条件下培养至菌液OD600值为0.6左右。
配制两瓶100mL无菌的胰蛋白胨大豆肉汤培养基，按1︰100的比例将OD600值为0.6左右的种子菌液接种到100mL无菌的胰蛋白胨大豆肉汤培养基，其中一瓶不接种，作为阴性对照组。
于37℃、200rpm/min的恒温摇床中培养，分别于培养的0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h取出1mL菌液，在96孔板中每孔加入200μL菌液，每个时间点设置3个复孔，在酶标仪中检测OD600值，制作金黄色葡萄球菌的生长曲线。选取金黄色葡萄球菌处在稳定生长期的初期阶段，进行金黄色葡萄球菌来源OMVs的分离纯化。
金黄色葡萄球菌来源OMVs的分离纯化：
按1︰100的比例，将100μL金黄色葡萄球菌甘油冻存液无菌接种到10mL无菌胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，于37℃、200rpm/min条件下培养至菌液OD600值为0.6左右。将上述250μL金黄色葡萄球菌种子液无菌接种到含250mL含胰蛋白胨大豆肉汤培养基的1L培养瓶中(两瓶)，于37℃、200rpm/min的恒温摇床中培养至稳定生长期的初期阶段。收集处于稳定生长期初期阶段的金黄色葡萄球菌培养液500mL，在4℃，15000g条件下离心20min去除细菌后取上清液，过0.45μm滤膜去除杂质后收集上清液，上清液过0.22μm滤膜后收集上清，将上清经100kD滤膜进行超滤处理，去除蛋白质等大分子杂质，用200μL无菌PBS溶液溶解沉淀物，得到金黄色葡萄球菌来源OMVs的浓缩液。
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