广西牛肺炎支原体病原的分离和鉴定、药敏实验分析（下）
2.3病原生化性状和细菌L型测定
病原细菌L型测定无其他细菌形态出现。生化试验结果表明，只能发酵乳糖，不能水解精氨酸，对葡萄糖、木糖、覃糖、七叶苷、蔗糖、尿素和甘露醇均不能分解利用。
2.4PCR鉴定
利用牛支原体特异性基因op⁃p D/F F1和F2引物可以从样品中扩增出448 bp的片段，与预期相符，而应用牛传染性胸膜肺炎特异性引物扩增样品则为阴性（图3）。
图3病原的PCR鉴定结果
2.5opp D/F基因序列测定与比较结果
通过对病原的opp D/F基因的序列分析表明，病原（命名为Gxmboppdf）与国内首次分离的牛支原体HB0801及Hubei-1株同源性为99.3%（图4）。
2.6药敏试验结果
经48 h培养后观察，病原对氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、左氟沙星、恩诺沙星、林霉素、氯霉素、新霉素、强力霉素、诺氟少星、大观霉素、四环素高敏；对丁胺卡那霉素中敏；对阿奇霉素、红霉素低敏；对头孢拉定、青霉素、头孢曲松、利福平、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢唑啉、氨苄西林、罗红霉素、多粘菌素、复方新诺明耐药。
2.7其他细菌的分离
无菌取病牛肝、肾、肺、淋巴结分别接种TSA琼脂培养基和兔血营养琼脂培养基，37℃培养48 h后未见有菌生长。
图4广西牛支原体同源性比较及进化树分析
3、讨论
根据发病经过、临床症状、病理变化、病原培养特性、生化试验、PCR鉴定，确诊该病为牛支原体（Mycoplasma bovis）引起的犊牛肺炎，即传染性牛支原体肺炎。自美国人Hale（1961）首次从患乳腺炎的牛奶中分离到该病原，目前已证实牛支原体可引发牛肺炎、乳腺炎，此外，还可导致角膜结膜炎、耳炎、关节炎、生殖道炎症、流产和不孕等多种疾病，已在世界范围内存在。该病在欧洲最为严重，每年约有25%——33%的犊牛肺炎由牛支原体引起，经济损失达1.44亿——1.92亿欧元。在美国每年由牛支原体引起的牛呼吸系统疾病和乳腺疾病所造成的经济损失也高达1.40亿美元，感染率高达70%.2008年，我国部分地区肉牛暴发了以坏死性肺炎为主要特征的犊牛肺炎疫情，辛九庆、石磊、冉智光等证实该疫情是由牛支原体引起的“传染性牛支原体肺炎”，疫情波及湖北、河南、山东、东北三省等多个省市自治区，几乎涵盖了中国养牛的主要产区，牛发病率高达50%——100%，病死率达10%——50%，给我国的养牛业造成巨大的经济损失。广西是饲养水牛最多的省（区），存栏437万头，奶牛存栏8.77万头，最近几年肉牛产业也蓬勃兴起，引种和流通增多，以肺炎症状为主的病例时有发生，不易治疗，给养殖户造成很大的经济损失。
在临床诊断中，牛支原体引起的临床症状和病理剖检变化与牛传染性胸膜肺炎类似，造成诊断上的困难，因此病原分离与鉴定成为最终确诊的重要依据。本实验室在收集到牛肺脏病料时进行了病原的分离和鉴定，结果分离到1株牛支原体。此前，广西未见有牛支原体病的报道，本文首次报道了广西从外地引进的肉牛有该病的存在，但本病在广西的流行情况以及对广西养牛业造成危害程度有待进一步调查。
目前尚无商品化的疫苗对牛支原体病进行预防，临床上宜采取综合性的防治措施。一是加强对牛群的引种检疫，不从疫区引种，引种前应做好牛支原体病、结核、布鲁菌病、泰勒虫病等检测，防止引进病牛或带菌牛。牛群引回后应隔离检疫，确保牛群健康并做必要的预防接种和驱虫后方可混群；二是加强对牛群的饲养管理和消毒工作；三是对发病牛隔离治疗，早发现，早诊断，早治疗是有效控制本病的原则。在用药上宜全群（和病牛接触的牛群）用药，疗程要够，药量要足。药敏试验的结果表明，四环素类、喹诺酮类和泰乐菌素类对牛支原体敏感，但要注意经常变换药物，以免耐药性的产生而使治疗效果不理想。