采用双宿主菌提升大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20164发酵性能的方法
噬菌体作为替抗产品，生产发酵工艺已越发成熟。部分噬菌体发酵性能一般、无法实现高密度发酵，可通过调整感染复数、改变培养条件、更换宿主菌等方法提升发酵液的效价。但使用这些方法效果是有限的，一般当噬菌体发酵到某一数量级，由于噬菌体自身机制，噬菌体发酵液的效价便不再提升，通过这些方法一般仅能提升1个数量级,故一些本身效价低的噬菌体仍无法通过发酵生产达到令人满意的效价。现有技术中单一宿主的噬菌体发酵液效价一般在105-107pfu/mL，在实际应用中受一定的限制，制备的相关药物效果受限。
为克服相关技术中存在的问题，下面提供一种采用双宿主菌提升噬菌体发酵性能的方法，该方法根据获取的噬菌体一步生长曲线选取第二宿主BE-20096的添加时间；第一宿主BE-20261与噬菌体按照相同比例加入肉汤中培养后，添加第二宿主，并进一步发酵添加第二宿主的噬菌体混合发酵液；具体包括以下步骤：
以大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20164为具体实施对象，根据噬菌体RDP-EC-20164一步生长曲线选取适当时间(0.5h)添加第二宿主。噬菌体的第一宿主与噬菌体按照相同比例加入肉汤中，37℃发酵0.5h后，添加第二宿主，发酵4-6h。如此，使用双宿主菌共同发酵来提升噬菌体发酵性能。
具体的，采用双宿主菌提升噬菌体发酵性能的方法具体包括以下步骤：
S1，根据裂解谱实验筛出被RDP-EC-20164裂解的多株大肠杆菌；基于筛出的多株大肠杆菌，通过成斑实验筛出多株大肠杆菌作为备选宿主菌，备选宿主菌为第二宿主；
S2，将第一宿主和噬菌体液RDP-EC-20164相同体积接种量加入LB肉汤中培养，获取噬菌体RDP-EC-20164一步生长曲线；
S3，基于步骤S2获取的噬菌体RDP-EC-20164一步生长曲线，添加第二宿主，继续发酵，测定混合发酵液效价，以及进行统计分析。
大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20164，透过电镜观察该噬菌体为肌尾病毒，头部长度约为118.8nm，尾部长度为122.4nm，基因组全长为48591，基因序列为SEQ ID NO：1，保藏编号为CGMCC No.45369。
根据噬菌体RDP-EC-20164一步生长曲线选取适当时间添加第二宿主。噬菌体的第一宿主与噬菌体按照相同比例加入肉汤中，发酵适当时间后，添加第二宿主，发酵4-6h。使用双宿主菌共同发酵可以提升发酵性能。