不同氨基氮含量的培养基对鼠疫菌生长的影响
目的探讨不同氨基氮含量对鼠疫菌生长的影响观察。方法同批次消化液不同含量(120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L)氨基氮作为基础消化液制备的赫氏琼脂培养基(指100mL培养基内所含的氨基氮)进行活菌数实验，寻找出适宜鼠疫菌生长的最佳氨基氮。结果通过反复实验发现6种不同氨基氮含量对鼠疫菌生长影响中170mg/L含量的赫氏培养基优于其它5种氨基氮含量培养基，经统计学分析有差异(P<0.05)。结论鼠疫菌生长的最佳氨基氮含量为170mg/L。
细菌在生长发育过程中需要一定的营养，最主要的是氨基酸、糖和金属离子，国内鼠疫实验室常用的基础培养基有肉浸液琼脂，其中以胰酶消化液为优。本所制备的基础培养基为赫氏消化液，可用于鼠疫菌分离、纯化、判定等，其氨基氮含量在700～1000m g/L，按每100m L培养基内含75m g氨基氮的比例，鼠疫菌生长良好，但氨基氮含量多少才是鼠疫菌最适生长的温床，国内外未曾报道，为此，本试验通过6种不同氨基氮含量的培养基，筛选鼠疫菌生长的最佳氨基氮。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1试剂氯化钠，天津市化学试剂批发公司;磷酸氢二钠，天津市凯通化学试剂有限公司;琼脂粉，北京欣经科生物技术有限公司;蛋白胨(英国进口);赫氏消化液，由青海省地方病预防控制所制备。1.1.2菌株EV76巴黎株，鼠疫强毒标准141株，由鼠疫菌专业实验室提供。
1.2方法
1.2.1赫金格尔消化液制备
量取自来水5 000m L置白瓷桶内，加入绞碎去脂腱的牦牛肉，煮沸30min并随时搅拌。待冷却至56℃时加入猪胰脏250g，无水碳酸钠70g，测其p H值为7.8，加入三氯甲烷80～100mL，冷却以橡皮塞紧塞瓶口，置于37℃温箱内消化7～9d，每日振荡3～4次，消化良好时，上清液黄色透明，残渣沉于瓶底且甚少，氨基氮500～800mg/L或更高。
1.2.2氨基氮含量测定
根据每毫升N/10氢氧化钠滴定1.4毫克氨基氮的公式来计算，所得的数字乘以100即为每100m L培养基内所含氨基氮的毫克数。本次试验所用氨基氮含量在820m g/L在所需范围之内。
1.2.3赫金格尔培养基制备
选取6种氨基氮含量即120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L(指每100m L中所含的氨基氮消化液)，称取氯化钠0.3%、磷酸氢二钠0.1%、琼脂粉2%、蛋白胨1%，按6种不同氨基氮量加入相应消化液和蒸馏水(每种总量分别为1000mL，8磅15m in，测p H7.0，15磅30m in高压灭菌，加10%脱纤维兔溶血10m L，混匀，倾注平皿，放入37℃温箱24h无菌生长方可使用)。
1.2.4活菌数测定
取EV76和鼠疫强毒标准株141 28℃24h斜面培养物按常规稀释法稀释，用生理盐水比浊成7亿/m L，使鼠疫菌悬液最终浓度为1000个菌/m L，取制备好的6种不同氨基氮含量培养基平皿各10个，分成两组，一组为EV76的菌悬液，一组为鼠疫强毒菌141菌悬液，每组各为5个平皿，分别接种菌悬液0.1m L，用L棒涂抹均匀，28℃48h培养后计算菌落数，经检查(检测)批数12批，每批各5个平皿，每种氨基氮含量的培养基平皿数为60个。
2结果
2.1赫氏培养基不同氨基氮含量对EV76生长影响
观察表1显示170mg/L的赫氏培养基与120m g/L、150m g/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L对鼠疫菌生长的影响，经统计学分析(t检验)有差异(P<0.05)。
2.2赫氏培养基不同氨基氮含量对鼠疫菌141生长影响
观察表2显示，170mg/L的赫氏培养基与120mg/L、150mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L对鼠疫菌生长的影响，经统计学分析(t检验)有差异(P<0.05)。
表1不同氨基氮含量对EV76 Paris株生长影响的观察
表2赫氏培养基不同氨基氮含量对强毒菌141生长影响的观察
3讨论
鼠疫的判定是以分离鼠疫菌为依据的，培养基是分离鼠疫菌的基本条件之一，在鼠疫病原检验中发挥着重要作用，其成分和质量直接影响鼠疫菌的生长、繁殖和分离。国内实验室常用的基础培养基有肉浸液琼脂，其中以胰酶消化液为优。细菌在生长过程中需要一定的营养，最主要的是氨基酸、糖和金属离子。所以消化液氨基氮含量的高低直接影响培养基的质量，每批消化液氨基氮范围需达到500～800mg/L或更高，即每100mL培养基内含75mg氨基氮的比例，但究其鼠疫菌生长的最佳氨基氮，目前国内外还未曾报到，我们选取了6种剂量组的不同氨基氮即120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L进行了反复试验，经统计学分析(t检验)有差异(P<0.05)，表明170mg/L的消化液鼠疫菌生长优于其它5种氨基氮。由此得出结论鼠疫菌生长的氨基氮需有一定的范围，含量过高或过低都会影响其生长。这就消除了以前误认为只要氨基氮含量越高其鼠疫菌生长就越好的误区，因此，只有寻找适宜的氨基氮含量才是鼠疫菌生长的最有利条件。通过该实验筛选出170mg/L是鼠疫菌生长的最适氨基氮。
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