利用CIRBP作为胰腺癌诊断及治疗分子标记物（细胞增殖生长曲线检测步骤）
RIP技术(RNABindingProteinImmunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀)，是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析；即用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白，防止非特异性的RNA的结合，免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来，结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip)，定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定；目标蛋白是一种应激反应蛋白，在应激反应过程中，可以从细胞核迁移到细胞质，此外，目标蛋白还可以从细胞中分泌出来，在细胞外作为损伤相关分子模式发挥功能，促进炎症反应，并在急性和慢性炎症中发挥重要作用。
一种利用CIRBP作为胰腺癌诊断及治疗分子标记物的方法，所述方法步骤包括如下：
步骤1：材料准备，准备试剂细胞培养试剂：胎牛血清，DMEM-高糖培养基，RPMI-1640培养基，青链霉素，PBS磷酸钾缓冲液，Trypsin-EDTA(0.25％)phenol red以及实验耗材6孔板细胞培养板，12孔板细胞培养板，24孔板细胞培养板，48孔板细胞培养板，96孔板细胞培养板，巴氏吸管；
步骤2：细胞复苏，将水浴锅预热至37℃，用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面，在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等，取出冻存管，迅速解冻，迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，在冻存管内还存在一点点没融化的时候，取出，用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内，制备细胞悬液，将细胞转移至一个15ml离心管内，一滴一滴地加入预热好的培养基，同时一边晃动离心管；加入培养基的量要达到10ml以上，离心，在低速离心机上，以800rpm离心5分钟；吸去上清，然后用1ml培养基重悬细胞，将细胞悬液分装入培养皿内，将培养皿放入37℃含CO2的培养箱内培养，换液的时间由细胞沉降速度情况而定；
步骤3：细胞培养，将水浴锅预热至37℃，用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面，在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等，取出细胞培养瓶，无菌操作，打开瓶盖，吸掉旧培养液，用PBS洗涤细胞一至二次，加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，轻洗细胞皿底部，吸掉trypsin-EDTA溶液，放入37℃培养箱2-3分钟，轻拍培养瓶壁使大部分细胞脱落，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，加入适量含血清之新鲜培养基终止trypsin作用；
步骤4：实验分组，检测项目为RIP检测CIRBP调控TP53、、PCR检测CIRBP、TP53、wb、CIRBP、ACSL4、PTGS2、NOX1、GPX4、FTH1、普鲁士蓝染色、激光共聚焦检测线粒体活性氧ROS、谷胱甘肽GSH检测、流式凋亡检测、细胞增殖生长曲线检测；
步骤4中细胞增殖生长曲线检测步骤为a：取各处理组细胞进行下面实验；b：消化细胞后吹打散细胞，计数，调整细胞浓度为1×105个/ml，分到96孔板，每孔100ul，即每孔细胞为1×104个；c：贴壁细胞需待细胞贴壁后，再收集各时间点细胞进行检测；d：收集各个时间点的细胞(0h，24h，48h，72h)加入CCK-8溶液(碧云天，Cat.No.C0037)，比例为1/10。即100ul培养液加入10ul检测液；e：在孵育4小时后，酶标仪读板，CCK-8检测读取OD450数据。
步骤5：RIP检测P CIRBP调控TP53。
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