绘制铜绿假单胞菌生长曲线【检测步骤】
用一次性接种环挑取一环实验室保存铜绿假单胞菌标准菌株（编号ATCC 9027）污染自超市采购的经检测无菌落生长的5 L装包装饮用水（同一批次购买2瓶），在20℃下放置30 d，且在放置过程中，在其生长曲线的稳定期，吸取1 mL加入至另一瓶包装饮用水中，在4℃下放置35 d（在污染之前，每桶水分别取500 mL在各个温度下放置，留作空白对照），根据其在水中的铜绿假单胞菌的菌落数变化绘制生长曲线。
（1）标准菌株活化。将保存于-70℃超低温冰箱的铜绿假单胞菌标准菌株磁珠管取出放入4℃冰箱，让其磁珠温度升高。提前制备营养琼脂固体培养基，在超净工作台下完成以下步骤：用接种针挑取磁珠，在营养琼脂上划线，36℃下培养24 h。待营养琼脂上生长出铜绿假单胞菌单菌落后，开始下一步骤。
（2）操作步骤及培养。不同温度下保的试验样品，每间隔一段时间，从中吸取1 mL加入无菌培养皿中，倒入已灭菌的假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂，然后在36℃下培养48 h，然后计数，绘制生长曲线。
20℃下铜绿假单胞菌生长曲线图如图1所示。由图1可知，铜绿假单胞菌生长稳定期在第4～6 d。在其菌生长的稳定期，吸取1 mL加入包装饮用水中，4℃下放置35 d，其试验样品结果生长曲线如图2所示。
图1 20℃铜绿假单胞菌生长曲线图
图2 4℃放置35 d铜绿假单胞菌生长曲线图
由试验结果可知，铜绿假单胞菌对于生长环境要求不高，但其对温度特别敏感。在20℃下，其生长曲线包含细菌的4个生长时期：迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期。其稳定期为放置的第4～6 d，此期间其菌落数无变化，无其他干预手段，整个生长周期在30 d左右。但在4℃下，该菌基本不生长，菌落数一直呈现下降趋势，这也可以解释在冬天温度较低时，部分包装饮用水企业铜绿假单胞菌检出率不高的现象。
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