Y群脑膜炎奈瑟菌对13种抗菌药物敏感性试验——结果
2结果
2.1病例基本情况
病例1于2022年5月25日18时在操场活动后，出现发热、乏力，未在意。19时出现神志淡漠，尚能对答，21时被同学送到当地医院发热门诊就诊，体温40.3℃，行血常规、肺部CT检查，肺部CT提示双肺散在炎症，给予地塞米松及氨林巴比妥等对症处理，病例体温降至39.0℃。5月26日4时体温39.9℃，神清，双下肢轻度水肿，双肺呼吸音粗，未闻及湿啰音。7时左右出现全身皮肤黏膜散在瘀斑，随后皮肤黏膜瘀斑较前增多、扩大，8时左右病例出现意识障碍，表现为烦躁不安、对答不切题，病情危重。5月26日9时因病例病情加重转诊至当地三甲医院ICU救治，入院查体不配合，病例意识模糊、烦躁不安，全身散在皮疹、出血点及瘀斑，双侧瞳孔2.0 mm，等大等圆，对光反射灵敏，双肺呼吸音粗，可闻及少许干、湿啰音，四肢肌力检查不配合，大小便失禁。后经抢救无效死亡。5月26日采集患者全血标本。5月27日早上流行病学调查人员采集了与患者有密切接触的同学、老师、亲友的咽拭子共80份，其中男56人，女24人，年龄18~63岁。
病例2，男，15岁，辍学，无业人员。2022年5月9日发病，意识障碍，呼之不应，伴发热，最高体温39.2℃，头痛，恶心，呕吐。5月9日就诊龙华区某医院，后经治疗好转出院。5月27日采集患者血液培养瓶。6月2日采集密切接触者57份咽拭子，其中男12人，女45人，年龄22~59岁。
2.2病原学检测
病例1和病例2的分离株氧化酶阳性，NH鉴定卡显示为Nm。病例1的80份密接样本有17份22株氧化酶阳性，经普通PCR鉴定，有5份扩增出的片段清晰符合crgA基因（230 bp）和sodC基因（282 bp）片段长度，鉴定为脑膜炎奈瑟菌，见图1。病例2的57份密接样本未检出脑膜炎奈瑟菌。
图1 17份病例1密接样本分离株crgA基因和sodC基因PCR扩增电泳结果
病例分离株和咽拭子Nm分离株共7株Nm，在血平板上呈灰白、圆形、光滑凸起、湿润不溶血。血清学玻片凝集试验均为Y群脑膜炎奈瑟菌，见表1。荧光PCR检测结果显示，7株Nm的ctrA基因和sodC基因均阳性，Y群Nm特异性基因片段均阳性，其余A、B、C、W、X群Nm特异性基因片段阴性。病例1密切接触者Y群Nm携带率为6.25%（5/80）。
表1病例和密切接触者脑膜炎奈瑟菌检测结果和基因组信息
注：5例密切接触者均为病例1的。
2.3全基因组测序
7株Y群Nm分离株的基因组和GC含量见表1。将拼接好的全基因组序列上传到国际PubMLST数据库进行比对，7株Nm序列型均为ST-1655，属于ST-23克隆群（ST-23 clonal complex,CC23）。7株Nm的耐药相关基因序列完全相同，喹诺酮耐药相关基因gyrA等位基因号为1、青霉素耐药相关基因penA为22，利福平耐药相关基因rpoB为34，与pubMLST数据库中大部分ST-1655菌株的等位基因号相同。根据数据库统计，具有这几个等位基因序列的大部分菌株对相应抗菌药物敏感。7株Nm抗原蛋白的氨基酸型别完全相同，H因子结合蛋白（factor H binding protein，fHbp）为v2.25，奈瑟菌肝素结合蛋白A（Neisserian heparin-binding antigen，NHBA）为7，所有菌株不含有奈瑟菌黏附蛋白A（Neisseria adhesin A，NadA）。外膜蛋白基因porA、porB、fetA基因分型结果一致，其中porA VR1为5-1型（变异位点为1），porA VR2为10-1型（变异位点为1），porB为3-117型，fetA为F4-1型。菌株基因亚型为Y：P1.5-1，10-1：F4-1：ST1655（CC23）。这些基因分布和序列特征与pubMLST数据库中大部分ST-1655菌株相同。
2.4药物敏感性试验
7株Y群Nm分离株对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、美罗培南、氯霉素、阿奇霉素、米诺环素、利福平、环丙沙星、萘啶酸、左氧氟沙星12种抗菌药物敏感，对复方新诺明耐药，见表2。
表2 7株Y群脑膜炎奈瑟菌对13种抗菌药物的最低抑菌浓度μg/mL
Y群脑膜炎奈瑟菌对13种抗菌药物敏感性试验——摘要、材料与方法