鲫鱼戴氏西地西菌生长曲线绘制及药敏试验结果（一）
摘要：本试验旨在从患病鲫鱼的鳃、肾、肝、胰脏等病灶部位分离病原菌，并对其进行鉴定。采用革兰染色的方法观察其为短杆状、呈单双排列的革兰阴性菌，利用丹麦Biosense生产的全自动微生物生长分析仪进行生化鉴定及药敏试验分析，结果为戴氏西地西菌，对亚胺培南、美洛培南、左氧氟沙星和环丙沙星等高度敏感；对氨曲南和头孢唑啉耐药性最强。并绘制了此菌的生长曲线，发现2～6 h进入对数期，对数期时间较早，22 h后就进入了稳定期。后进行回归试验发现死亡率为66.7%，危害较大。因鱼类中发现戴氏西地西菌较少，所以本文对于鱼类戴氏西地西菌的研究有重要意义。
戴氏西地西菌属西地西菌属，还包括奈氏西地西菌和拉氏西地西菌。戴氏西地西菌为革兰阴性杆菌，大小为0.5～0.6μm×1～2μm，大多数菌株能运动，兼性厌氧。是一种条件致病菌，被从人类的尿液、胆汁、痰和血液中检出，但是鱼类中很少发现[1-3]。2011年熊祝嘉等[4]从患者尿液中检测出戴氏西地西菌一例，可导致泌尿系感染，而造成间断躁动6年，加重伴喘憋，呼吸困难等现象。Sevki Kayis等对土耳其-黑海区南方学院的虹鳟鱼细菌进行调查，春天和夏天都各分离出了
1株戴氏西地西菌，其存在部位有肾脏、脾脏和肝、胰脏，这也证实了鱼里面有戴氏西地西菌。本试验从患病鲫鱼中分离到1株戴氏西地西菌，进行药敏试验，筛选了防治药物，为预防和治疗戴氏西地西菌引起的鲫鱼类疾病提供了一定的参考依据。
1、材料与方法
1.1材料
试验鱼，购自吉林省某渔场，鲫鱼出现鳃出血，胸鳍和腹鳍基部及生殖口均出现充血，鱼身出现不同的出血点及溃烂。剖检死鱼，发现鳃部发红且有的鳃丝发白，肠道、肝胰脏、脾脏等处均出现充血症状。
1.2试验仪器及试剂
150G全温振荡培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、电热恒温鼓风干燥箱、超净工作台、722N可见分光光度计、革兰染色试剂盒、丹麦Biosense自动细菌鉴定/药敏检测系统、4℃冰箱、微量移液器、试管、直径90 mm平皿、医用1 mL注射器、麦康凯琼脂培养基、LB培养基、生理盐水。
1.3方法
1.3.1病原菌的分离
无菌的超净工作台剖检患病鲫鱼，取其鳃、肝、胰脏和肾脏等病灶部位，制成匀浆。将匀浆稀释成不同浓度，微量移液器取200μL匀浆涂布到麦康凯琼脂平板上，30℃培养24 h后观察菌落生长状态。挑取优势菌群划线纯培养，待菌落形态生长一致，挑取单菌落用80%甘油进行保藏。
1.3.2病原菌的鉴定
1.3.2.1革兰染色法
无菌条件下洁净的载玻片滴少许生理盐水，用接菌环将分离纯化后的菌株均匀的涂布到载玻片上，干燥固定，后用结晶紫染液初染、碘液媒染、酒精脱色、番红染液复染后镜检。
1.3.2.2生化鉴定
用丹麦Biosense微生物生长动态监测系统仪器进行鉴定，鉴定板为革兰阴性菌鉴定板，96孔，试验周期15 h结束后观察结果并分析。