特雷唑来与其他抗结核药物联用使用对结核分枝杆菌的生长抑制作用——资料与方法
目的评价特雷唑来对不同耐药类型的结核分枝杆菌临床分离株的体外抑菌作用，为临床应用提供实验依据。方法采用微孔板观察法，测定特雷唑来对标准株H37Rv及临床分离的敏感、单耐药、多耐药、耐多药以及广泛耐药各20株(共100株)的MIC，再测定特雷唑来与7种常用抗结核药物联合使用时，对H37Rv和10株MTB临床分离株(敏感、单耐药、多耐药、耐多药以及广泛耐药各2株)的MIC，通过计算分级抑菌浓度指数(FICI)，观察特雷唑来对结核分枝杆菌的体外抑菌作用以及与其他抗结核药物联合使用时是否有协同作用。结果94.0%(94/100)的结核分枝杆菌临床分离株可被≤0.5mg/L的特雷唑来抑制生长，特雷唑来对敏感株、MDR菌株(耐多药和广泛耐药)及非MDR耐药菌株(单耐药和多耐药)的MIC差异无统计学意义(χ2=0.578，P>0．05)。特雷唑来与7种抗结核药物在体外联合使用时对结核标准菌株H37Rv和临床分离株均未表现出相关性。结论特雷唑来对结核分枝杆菌,尤其是耐多药和广泛耐药菌株，均有很好的体外抑菌作用，且与细菌对其他抗结核药物是否耐药无关。
结核病是一种严重危害人民身体健康的慢性传染性疾病。世界卫生组织(WHO)新出版的《2015年全球结核病报告》以及《全国第五次结核病流行病学抽样调查资料汇编》，均强调全球和我国新发肺结核患者以及新发耐多药结核病患者逐年增加。耐药结核病尤其耐多药(MDR-TB)和广泛耐药(XDR-TB)结核病已成为全球结核控制工作中的重点和难点。研究耐多药结核(MDR-TB)和广泛耐药结核(XDR-TB)耐药机制以寻找新的抗耐多药结核(MDR-TB)和广泛耐药结核(XDR-TB)药物变得刻不容缓。第一代噁唑烷酮类药物利奈唑胺在我国结核病临床治疗中刚刚起步，第二代噁唑烷酮类药物特雷唑来(torezolid)对临床所有的G+,某些G-菌及非典型衣原体显示出较好的抑菌作用。本研究通过测定第二代噁唑烷酮类药物特雷唑来对临床分离的结核分枝杆菌的体外抑菌作用，探讨特雷唑来与其他抗结核药物联用时的体外相互作用，为临床合理使用特雷唑来提供实验室依据。
资料与方法
材料
1菌株来源：结核分枝杆菌菌株：H37Rv标准株(ATCC27294)和100株临床分离株均为重庆市公共卫生医疗救治中心结核实验室(2015.01.01-2016.05.30)保留菌株。100株临床分离株已经结核菌药物敏感性试验(比例法)确定的敏感、单耐药、多耐药、耐多药和广泛耐药的结核分枝杆菌菌株各20株。
2主要药物和试剂：特雷唑来(美国MCE上海皓鸿药物研究有限公司原粉),异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卡那霉素、氧氟沙星、利福布汀均为美国Sigma公司产品。
方法
1微孔板观察法检测MIC(mg/L)：特雷唑来0.016-8,异烟肼0.0125-1.6，利福平0.0625-8，链霉素0.125-16，乙胺丁醇0.3125-40，卡那霉素0.3125-40，氧氟沙星0.125-16，利福布汀0.03125-4，药物浓度以二倍稀释方式由高至低递减。将标准株H37Rv和100株临床分离菌株转种于改良罗氏培养基上，刮取培养2-3周的新鲜菌落，磨菌比浊制成1麦氏单位。再用液体培养基稀释100倍后，向无菌96孔板各微孔加入200μL菌液。各菌株均设2个不含抗菌药物对照孔，2个含10%及1%菌液浓度的生长对照孔和2个仅含有液体培养基的空白对照孔。将96孔板于37℃孵育，7 d后每日观察结果，孔底出现肉眼可见的白色菌体沉淀为生长阳性，无肉眼可见的菌体沉淀为生长阴性。本研究中MIC定义为孔底可见白色菌体沉淀<10%对照孔的最低药物浓度。空白对照孔出现白色沉淀时，提示检测板有污染，需重新进行检测。
2观察特雷唑来与其他抗结核药物联用的体外相互作用：从上述菌株中选取H37Rv和10株临床分离株，其中包括敏感株、单耐药菌株、多耐药菌株、耐多药菌株、广泛耐药菌株各2株，进行药物相互作用实验。菌株对上述7种药物单独应用的MIC检测及其与特雷唑来联合应用的MIC检测方法同上。联合用药中每种抗结核药的浓度范围以二倍递增的方式，选取1/32-8倍MIC的9个浓度。计算分级抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index，FICI)：FICI=甲药联用MIC/甲药单用MIC+乙药联用MIC/乙药单用MIC，FICI≤0．5为协同作用，0．54为拮抗作用。
特雷唑来与其他抗结核药物联用使用对结核分枝杆菌的生长抑制作用——资料与方法
特雷唑来与其他抗结核药物联用使用对结核分枝杆菌的生长抑制作用——统计学处理、讨论
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