苍鹭养殖如何控制沙门菌病?用什么药好【药敏试验二】
1.2.7试验动物剖检及细菌分离
小鼠攻毒之后注意观察其精神状态和死亡情况,待小鼠死亡后,采用常规剖检方法先将小鼠腹腔打开,再打开胸腔,观察各个脏器的病理变化,摘下肝脏以备分离细菌所用,待剖检后,进行细菌分离操作,以上操作都要求无菌。
1.2.8致病菌的鉴定
从死亡小鼠肝脏分离的细菌进行革兰染色镜检,对比从原始病料中分离的细菌,最终确定是否是主要致病菌。
1.2.9生化鉴定
通过纯培养的细菌选择典型菌落接种于8%兔鲜血琼脂固体试管斜面培养基上置于37℃恒温培养箱中培养12~24h,用钩菌环挑选典型单个菌落接种于微量生化鉴定管中,接种完后,微量生化管放于灭菌平皿中切忌要保持水平放置,置于37℃恒温培养箱中,培养24~48h,进行观察,记录结果。
1.2.10药敏试验
采用琼脂纸片扩增法,用高压灭菌后的棉拭子蘸取扩大培养后的菌液均匀涂布于8%兔鲜血琼脂培养基上,为了保证涂布均匀,需要重复涂布3次,待水分干后,贴上药敏纸片,轻轻按压,确保其贴稳,防止掉落和移动,注意用镊子夹取药敏纸片贴于平板上时要确保药敏纸片完全与培养基接触,以免影响药物扩散不均匀。一个平皿贴7片纸片,最中间一块,其余6块均匀分布其周围。贴好药敏纸片后放入37℃恒温箱中培养12~24h,观察测量抑菌圈的大小,抑菌圈≧20mm为极度敏感;15~20mm为高度敏感;14~10mm为中度敏感;10mm以下大于0为低度敏感;等于0为不敏感。药敏试验操作方法按2005年版CLSI/NCCLS M100-S15所述方法进行。
2试验结果
2.1病原菌的鉴定
从苍鹭肝脏分离的细菌在8%兔鲜血琼脂培养基上置于37℃恒温箱中培养12~24h,生长菌落形态都为边缘整齐、光滑、湿润、半透明、略隆起的细小圆形菌落,没有出现溶血环;S.S.琼脂培养基上细菌生长良好,长成半透明、圆形、菌落中间有黑点的小菌落;在麦康凯培养基上都长出半透明、光滑小菌落,挑取典型菌落进行革兰染色,结果为革兰阴性菌,形态都为长杆状或短杆状菌落,多数散在。通过细菌形态观察、染色镜检及生化鉴定结果最终得出该细菌为沙门菌。
2.2试验动物攻毒
将细菌扩大培养物对小鼠进行腹腔注射后,小鼠全部在12h之内死亡,表中死亡时间为2只小鼠平均死亡时间,具体结果见表1。
表1动物攻毒试验
2.3试验动物病理剖检及致病菌鉴定
通过对死亡小鼠进行病理剖检均发现小鼠肝脏肿大、坏死,心外膜少量点状出血,肠道黏膜严重出血,肠壁变薄、变黄,臌气。剖检完死亡小鼠取下其肝脏进行细菌分离,置于37℃恒温培养箱中进行培养,挑取单个菌落进行革染色再镜检观察,发现菌落形态大小、色泽都和原分离菌一致,镜检也发现和原分离菌的形态相同,因此得出原分离细菌为该病例主要致病菌。
2.4生化鉴定结果见表2。
2.5药敏试验结果见表3。
表2生化鉴定
表3药敏试验
3讨论
沙门菌病和大肠杆菌病属于条件致病菌,人和动物的沙门菌病一直是一个世界性问题,沙门菌菌型繁多,分布广泛,是一种重要的人畜共患病的病原体。沙门菌对于我国畜牧业的威胁越来越大,而且没有很好的有效控制办法,长期以来,以治疗、预防疾病和促进畜禽生长为目的,不合理使用抗生素,导致抗生素过度使用或滥用,在抗生素的选择性压力下,沙门菌耐药性不断上升,这已成为严重的公共卫生问题。沙门菌耐药的生化反应机制主要有5种:酶对抗菌药物的修饰或破坏;外输泵介导抗菌药物的主动外排;抗菌药物的渗透障碍,导致药物摄取减少;药物作用靶位的改变;建立新代谢途径,沙门菌发生耐药性常常不是一种生化反应机制起作用,而是两个或多个不同的生化反应机制共同作用。从而可以看出,要解决沙门菌的耐药性问题面临非常严峻的挑战。
本试验分离到的沙门菌可能是由于种蛋带毒或者是由于野生放养于沼泽地而感染沙门菌,鉴于这种可能性,必须对种蛋和沼泽地的泥水进行检测,鉴于我国国情,在生产中常用国标法,有条件的单位应用自动酶标检测仪,ELISA,PCR试剂盒检测,做到从源头消灭病原菌,才能更好地控制沙门菌病。苍鹭养殖属于特种经济动物养殖,养殖规模小,养殖户数量少,可以借鉴的经验更是很少,很多经验都是靠养殖户自己摸索,这无疑会走很多弯路,本试验得出的一些数据可能对于苍鹭养殖能起到一个参考作用。
鉴于本试验得出的结论,对该病例的治疗与预防提出以下建议措施:用环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、甲氧苄啶进行交替使用拌料和饮水,使用多维、中草药等增强免疫力的药物进行辅助治疗;尽量减小养殖密度,保持空气流通;对于投喂的鱼粉饲料要进行把关检测,防治霉变及病菌污染。