巨大芽孢杆菌BM24生长曲线、耐药性、益生潜力评估及药敏试验（三）-上海谓载科技有限公司

巨大芽孢杆菌BM24生长曲线、耐药性、益生潜力评估及药敏试验（三）

来源：动物营养学报发布时间:2025-03-12 16:53:26 浏览：53 次

2结果与分析

2.1分离菌株鉴定结果

2.1.1形态学鉴定

分离菌株在LB琼脂培养基上培养后单菌落呈淡黄色圆形或椭圆形，微凸起，不透明，表面光滑，边缘整齐(图1-A);革兰氏染色结果显示该菌株为革兰氏阳性杆状细菌(图1-B);芽孢染色可见内生孢子(图1-C)。

图1分离菌株形态A:LB琼脂平板上的形态;B:革兰氏染色(100×);C:芽孢染色(100×)。

2.1.2生化鉴定

如表1所示，对分离菌株的生化鉴定结果为V-P、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-甘露醇、明胶液化、pH 5.7生长试验结果呈阳性，柠檬酸盐、丙酸盐、7%氯化钠、硝酸盐还原、淀粉水解试验结果呈阴性。据此，初步判断该分离菌株为芽孢杆菌属。

表1分离菌株的生化鉴定结果“+”表示阳性反应，“-”表示阴性反应。

2.1.3 16S rRNA基因序列分析

分离菌株16S rRNA基因扩增产物片段大小约为1 500 bp(图2)，PCR扩增产物测序后结果制作进化树(图3)，分离菌株序列与NCBI上已发布的巨大芽孢杆菌基因组序列同源相似性均在90%以上，因此确定该分离菌株为巨大芽孢杆菌，将其命名为巨大芽孢杆菌BM24。

图2分离菌株16S rRNA基因序列鉴定结果M:DNA分子量标准DL2000;+:阳性对照;NC:阴性对照;BM24:分离菌株。

图3分离菌株和芽孢杆菌属细菌进化树Bacillus:芽孢杆菌属;Bacillus megateriun:巨大芽孢杆菌;Bacillus aryabhattai:阿氏芽孢杆菌;Bacteria:细菌;starin:菌株。

2.2羊源巨大芽孢杆菌BM24的益生潜力评估结果

2.2.1耐酸性

由图4可知，羊源巨大芽孢杆菌BM24能够在不同的pH下存活，在pH 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0的条件下培养4 h后，其相对存活率分别为28.28%、27.33%、73.63%、100.37%、103.24%、97.98%。

图4羊源巨大芽孢杆菌BM24在不同pH条件下的相对存活率

2.2.2耐胆盐

由图5可知，羊源巨大芽孢杆菌BM24在0.1%、0.2%、0.3%胆盐条件下培养4 h后，相对存活率分别为47.93%、48.66%、49.95%，表现出较好的胆盐耐受性。

图5羊源巨大芽孢杆菌BM24在不同浓度胆盐条件下的相对存活率

2.2.3药敏试验

选取15种常用抗菌药物对羊源巨大芽孢杆菌BM24进行药敏试验，结果表明该菌株除对克林霉素与青霉素G耐药、红霉素中度敏感外，对其余12种抗菌药物均表现出敏感性(表2)。

表2羊源巨大芽孢杆菌BM24药敏试验结果

2.2.4溶血活性

如图6所示，羊源巨大芽孢杆菌BM24在绵羊血平板上生长良好，菌落周围无溶血环，表明其无溶血活性。

图6羊源巨大芽孢杆菌BM24在血琼脂平板上形态

2.2.5抗菌活性

由表3可知，羊源巨大芽孢杆菌BM24对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有抑制效果，其中对沙门氏菌及大肠杆菌的抑制效果较强。

表3羊源巨大芽孢杆菌BM24抑菌试验结果

2.3生长曲线

羊源巨大芽孢杆菌BM24的生长曲线如图7所示，菌株在0~2 h为生长迟缓期，2~6 h进入生长对数期，6 h后生长趋于平稳。

图7羊源巨大芽孢杆菌BM24生长曲线

2.4羊源巨大芽孢杆菌BM24的安全性评价结果

2.4.1灌胃小鼠剖检观察

整个试验期间，试验组与对照组小鼠均未见异常状态和死亡现象，毛色、精神状态和粪便均正常，口、鼻、耳及肛门处无异常分泌物。剖检观察时，试验组与对照组小鼠腹腔内主要器官均无明显肉眼可见病变，2组之间无明显眼观差异。

2.4.2灌胃小鼠体重及脏器指数变化

由图8可知，试验期间2组小鼠的体重无显著差异(P>0.05);从表4可知，与对照组相比，试验组小鼠肝脏、肾脏、脾脏指数均无显著变化(P>0.05)。

图8灌胃羊源巨大芽孢杆菌BM24对小鼠体重的影响数据点上方标注的数据为t检验的P值。

表4灌胃羊源巨大芽孢杆菌BM24对小鼠脏器指数的影响

2.4.3灌胃小鼠血细胞指标变化

如表5所示，灌胃羊源巨大芽孢杆菌BM24后小鼠血细胞指标与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。

表5灌胃羊源巨大芽孢杆菌BM24对小鼠血细胞指标的影响

2.4.4腹腔注射小鼠剖检观察

腹腔注射后的7 d观察期间试验组和对照组小鼠均未见异常症状和死亡现象，精神状态良好;2组小鼠剖检腹腔内脏器无明显眼观病理变化。