水貂李氏杆菌的分离鉴定、生化试验、药敏实验、毒力试验——结果、讨论
2结果与分析
2.1细菌镜检与培养结果
病死水貂解剖，可见肺脏肉变、脾脏肿大、肝脏土黄色、脑水肿，心血、肝脏、肺脏、脑组织触片，火焰固定，革兰氏染色呈现阳性杆菌，肺脏未发现，心血、肝视野中少量几个菌，脑组织视野中多处可见，菌体呈现规则短杆状，多数散在，个别呈现V形。接种平板37℃温箱培养24h可见，麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板不生长，营养琼脂平板生长少量，10%血清营养琼脂平板、10%兔鲜血琼脂平板生长良好，多量较小、圆形、光滑的菌落，鲜血琼脂可见明显的溶血环。
2.2细菌的生化结果
分离细菌接种生化反应管第3天观察记录结果，留样继续观察至第7天，可见发酵葡萄糖、麦芽糖、果糖、鼠李糖、海藻糖、糊精、水杨苷、蔗糖、乳糖，结果呈现阳性，不发酵阿拉伯糖、棉实糖、卫矛醇、木糖，呈现阴性。甲基红MR和VP试验均为阳性，具体结果见表1。
表1分离菌生化鉴定结果
注：“—”表示阴性，“+”表示阳性
2.3细菌的分子生物学鉴定结果
将PCR产物送测序公司测序，根据测序公司返回的测序结果，采用Bioedit软件进行人工校对，然后输入基因库用Blastn软件进行相似性比较，比较后构建系统发育树，与产单核细胞李斯特菌相似性为99%，确定为李氏杆菌。
2.4病料PCR检测结果
无菌取肝、脾脏、脑组织研磨，进行基因扩增，检测腺病毒、狂犬病毒、伪狂犬病毒基因全部为阴性，排除腺病毒、狂犬病毒，伪狂犬病引起的神经症状。
2.5犬瘟热试纸检测结果
病料滴于检测孔，观察试纸结果，C为对照红色成立，T线无色，犬瘟热抗原阴性。
2.6细菌的药敏试验结果
使用微生物快速药敏监测系统进行药敏试验，37℃温箱培养24h后观察可见壮观霉素、阿奇霉素、丁胺卡那霉素高敏，头孢喹肟、头孢噻呋、头孢曲松、左氧氟沙星、多黏菌素中敏，环丙沙星、恩诺沙星、强力霉素、林可霉素低敏。使具体药敏结果见表2。
表2分离菌的药敏结果(mm)
2.7毒力试验结果
小白鼠腹腔注射菌液后2~3d死亡，呈现败血症，对照组观察7d，健活；家兔眼结膜接种后，第2天开始发生化脓性的结膜炎，对照组观察7d正常；水貂肌肉注射后第2~3天死亡，死亡前神经症状，对照组观察7d，健活。所有发病死亡小白鼠、家兔、水貂进行解剖，细菌分离，可以分离到攻毒相同的李氏杆菌，镜检革兰氏染色阳性小杆菌，有的呈现V形，在血清平板37℃温箱培养24h后观察可见透明露珠样的菌落，鲜血平板可见明显的溶血环。
3讨论
3.1李氏杆菌的症状
李氏杆菌是人和多种禽、畜、野生动物共患的人兽共患病，在动物防疫和人的食品安全上都有重要的意义，不同动物有不同的临床表现形式，需要区别诊断，主要的临床特征是流产、神经症状、败血症，单胃和新生动家畜是败血症，反刍兽草食动物是脑炎、流产、结膜炎，啮齿类动物主要是败血症，猪表现败血症、流产、神经症状等多种症状，毛皮动物发病主要是神经症状，水貂发生李氏杆菌病，主要是神经症状。
3.3水貂李氏杆菌病的鉴别诊断
临床上水貂发生神经症状的疾病比较多，需要鉴别诊断，特别是发生在断奶后仔貂，其中维生素A缺乏、维生素B1缺乏、缺钙、神经性犬瘟热、伪狂犬病、狂犬病、腺病毒感染、链球菌病等都有不同程度的神经症状。维生素A缺乏、维生素B1缺乏属于维生素缺乏，主要表现神经症状，一般不死亡，或者发病很长时间才死亡；缺钙的主要症状是瘫痪，生长较快的水貂表现明显，其他食欲、精神不受影响，不会引起死亡；神经性犬瘟热发病主要是发病后期的犬瘟热，开始会有发热、结膜炎等症状；伪狂犬病、狂犬病、腺病毒感染都是病毒性疾病，诊断需要病毒检测，一般这几种病毒病，发病都较少，但是需要从流行病学和实验室诊断结合才能区别诊断；链球菌会引起的神经症状，也会引起败血症死亡，需要实验室的细菌分离鉴别诊断。实验室进行李氏杆菌诊断，镜检明显的是革兰氏阳性小杆菌，常见的致病性革兰氏阳性小杆菌还有丹毒杆菌，需要区别诊断，不能仅仅通过镜检革兰氏阳性确诊。
3.3李氏杆菌的防治
李氏杆菌病可以发生在多种动物上，各种环境都是李氏杆菌生长繁殖的场所，水貂饲料主要是各种肉食，有的养殖场饲喂病死动物、有的饲料品质不良或者被污染都会引发该病的发生。李氏杆菌的生长条件比较特殊，在1~45℃都可以生长，就是说放在冷藏的肉食若有李氏杆菌感染，细菌是一直生长的，这也是造成冷藏条件下引起食物中毒一个原因。李氏杆菌发病一般都是散发，平时注意的比较少，随着养殖场发病的增多，需要特别的注意预防。减少水貂养殖场李氏杆菌病的发生，禁止饲喂来源不明的病死动物，植物性饲料保存得当，特别注意灭鼠，老鼠会传播李氏杆菌。发生疾病需要及时鉴别诊断，确诊后及时使用抗生素预防治疗，发生疾病的一般治疗效果较差，关键是大群的预防。