链霉菌培养基的配制步骤及生长曲线的测定方法
一种链霉菌培养基的配制步骤、生长曲线的测定方法，包括以下步骤：
⑴链霉菌活化培养：将保藏于-80℃冰箱中的链霉菌涂布在MS固体平板培养基上，并在28℃培养箱中培养7天，即得平板菌种；
⑵链霉菌液体培养及时间梯度取样：在生长良好的平板菌种上取1cm2的孢子接种于装液量为10%的高氏一号液体培养基中，在28℃、160rpm的条件下培养；接种后每12h取一次样品，均匀分散菌丝体后使用去除尖端的1mL移液器吸头吸取菌液1mL，每个时间梯度取样设置三个平行；
⑶配制TTC溶液：称取2,3,5-氯化三苯基四氮唑粉末0.1g，放置在避光的离心管中，加入10mL浓度为10mg/mL的常温保存的PBS溶解，过滤除菌后每200μL TTC溶液分装在1.5mL的离心管中；⑷链霉菌与TTC反应：将TTC溶液以1%比例加入到步骤⑵取出的不同时间段样品中，室温避光反应30min，此时TTC反应后反应液中生成红色沉淀三苯基甲臢；
⑸吸光度测定：将反应液离心、去除上清并收集沉淀；随后向该沉淀中加入500μL二甲基亚砜溶液，室温避光溶解30min，形成红色溶液，该红色溶液离心后取上清液各200μL，加入96孔板中，以DMSO溶液作为空白对照，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其吸光度；
⑹生长曲线绘制：每个时间段样品的吸光度设置三个平行，使用AVERAGE函数求平均值，使用STDEVP函数计算标准误差；然后以测定时间为X轴，以490nm处的吸光值为Y轴，绘制散点图，对散点图进行非线性拟合，绘制生长曲线并得到拟合方程。
相关新闻推荐
2、不同包装方式下清蒸大黄鱼贮藏过程中PH值、菌落总数、菌群等的变化情况一览（三）