桑辛素对无乳链球菌生长曲线的影响
无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)隶属于链球菌属(Streptococcus),又称B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS),形态上通常呈现球形或卵圆形,链状或成对排列,为β溶血菌,依据荚膜多糖抗原可分为Ia、Ib、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ共10种血清型,是人畜共患的革兰氏阳性条件致病菌。
无乳链球菌是导致亚临床奶牛乳腺炎主要病原菌,该病会引起乳房局部炎症、肿胀、硬化和触摸时有明显的疼痛感。患病奶牛的乳汁浑浊、脓性或带血,产量减少,乳头出现红肿、溢乳、裂口、脱皮等现象,使奶牛体温高达39.5℃以上,精神萎靡、食欲减退、甚至拒绝进食,最终导致奶牛的死亡。该病原菌给整个乳制品行业带来巨大的经济损失。全球亚临床乳房炎的患病率为42.35%。
GBS除了可以感染牛、骆驼、鳄鱼、马和蛙等多种动物外,还可感染罗非鱼、海豚、海鲷和银鲳等多种水生动物,也可以感染人,无乳链球菌作为一种人、哺乳动物和鱼类共患的条件性致病菌已经引起人们的高度关注。无乳链球菌广泛的危害性,已经引起了人们的广泛关注。
通过接触含有GBS的器皿是无乳链球菌感染和传播的主要途径之一,因而需要定期清除其中的无乳链球菌,而普通抗生素的使用不仅容易产生耐药性,效果不尽人意,还会造成污染,而高温灭菌的方式则过于麻烦。
桑辛素(Morusin),又名桑根皮素或桑根白皮素,从桑科植物桑根皮提取的一种黄酮类天然化合物,棕黄色粉末,化学分子式为C25H24O6,相对分子质量420,熔点232-235℃;密度1.303 g/cm3,可溶于乙酸乙酯、甲醇,易溶于二甲基亚枫,不溶于石油醚、氯仿。桑是药食兼用的功能植物,在东西方都作药用。在中国,桑入药可上溯到《神农本草经》,以后历代本草经均有记载。虽然桑辛素对革兰氏阳性菌,表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌等致病菌都具有很强的抗菌活性。但有关桑辛素对无乳链球菌的抗菌效果及抗菌机制的研究国内外文献均未报道,现有技术也无法预见桑辛素对无乳链球菌的杀灭和抑制效果,因而我们研究了桑辛素对无乳链球菌的抗菌效果及抗菌机制。
下文是建立在发现桑辛素对无乳链球菌有较强杀菌性能的基础上,并测定桑了辛素对无乳链球菌的MIC和MBC,研究了桑辛素对无乳链球菌生长曲线的作用与影响。
桑辛素对无乳链球菌生长曲线的影响:通过48 h内每隔4 h取样测定无乳链球菌的细菌密度值绘制生长曲线,检测桑辛素对GBS的生长曲线的影响。通过对无乳链球菌进行实验,探究了桑辛素对GBS生长过程中的影响,实验结果如图1所示,将实验结果以细菌生长时间为自变量,以菌体吸光度为因变量的曲线图,空白对照组中细菌生长呈现S形曲线,从中可以得出无乳链球菌的对数生长期为16 h,进入稳定期时间为32 h。
添加桑辛素后无乳链球菌生长曲线变化明显,且随着药物浓度增加,对无乳链球菌生长的影响也越大。该实验中观察到,当桑辛素的浓度达到1/2MIC时,能够抑制GBS的生长,推迟细菌进入对数增长期。
此外,在稳定期中,添加了桑辛素的菌液浓度明显低于未添加桑辛素的对照组,这表明桑辛素具有较强的抑菌作用,且在1/2MIC浓度时即可发挥作用。桑辛素浓度为MIC时,无乳链球菌增殖能力显著下降。当桑辛素浓度为MBC时,发现桑辛素对无乳链球菌的生长曲线没有变化,表明桑辛素完全抑制无乳链球菌的生长。
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