沙门氏菌生长曲线的测定、来源及分离纯化
据世界卫生组织介绍，沙门氏菌广泛存在于家养和野生动物中，常通过受污染的食物感染人类。人感染后可能出现发热、腹泻、呕吐、腹痛等症状，通常持续2至7天。大部分感染者无需特殊治疗即可自愈，但儿童和老年人等特殊群体可能出现重症甚至死亡病例。想要研究沙门氏菌，就得先了解其生长特性，下面分享沙门氏菌生长曲线的测定步骤。
沙门氏菌生长曲线的测定：
将-80℃保存的沙门氏菌甘油冻存液，按1︰100的比例接种到5mLLB液体培养基中，37℃、200rpm/min条件下培养至菌液OD600值为0.6左右。配制两瓶100mL无菌的LB培养基，按1︰100的比例将OD600值为0.6左右的种子菌液无菌接种到100mLLB培养基中，其中一瓶不接种，作为阴性对照组。于37℃、200rpm/min的恒温摇床中培养，分别于培养的0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h取出1mL菌液，在96孔板中每孔加入200μL菌液，每个时间点设置3个复孔，在酶标仪中检测OD600值，制作沙门氏菌的生长曲线。选取沙门氏菌处在稳定生长期的初期阶段，进行沙门氏菌来源OMVs的分离纯化。
沙门氏菌来源OMVs的分离纯化：
按1︰100的比例，将100μL沙门氏菌甘油冻存液接种到10mL无菌LB培养基中，于37℃、200rpm/min条件下培养至菌液OD600值为0.6左右。将上述250μL沙门氏菌种子液无菌接种到含有250mL LB培养基的1L培养瓶中(接种两瓶)，于37℃、200rpm/min的恒温摇床中培养至稳定生长期的初期阶段。收集处于稳定生长期初期阶段的沙门氏菌培养液500mL，在4℃，15000g条件下离心20min去除细菌后取上清液，将上清液过0.45μm滤膜去除杂质后收集上清液，将收集的上清液过0.22μm滤膜后收集上清，将上清经100kD滤膜进行超滤处理，去除蛋白质等大分子杂质，用200μL无菌PBS溶液溶解沉淀物，得到沙门氏菌来源OMVs的浓缩液。