悬浮培养细胞生长曲线的绘制
悬浮培养细胞生长曲线的绘制
以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养，每天计数细胞直至平台期。
无菌
悬浮细胞培养
培养液，l00 ml
D-PBSA(细胞计数用）
24孔板
非无菌
装培养板的塑料盒
CO2温箱或5%C02以充盈塑料盒
悬浮细胞的传代培养：
1.直接传代法：
1)打开培养皿（瓶）盖（盖放在“非工作区”，盖、培养皿口不能接触任何物品）；
2)按照传代比例加入适当体积的新鲜的完全培养基，小心吹打成细胞悬液，再按照传代比例，等分装入新的培养皿（瓶）中；
3)盖好盖子，混匀，放入37℃，5%CO2培养箱中培养。
2.离心传代法：
1)打开培养皿（瓶）盖（盖放在“非工作区”，盖、培养皿口不能接触任何物品）；
2)将细胞悬液用移液枪或巴氏吸管吸至新的15mL离心管中；
3)1500rpm离心3min，弃上清，加入适当体积的新鲜的完全培养液，用吸管轻轻吹打成细胞悬液，按比例进行传代，将细胞悬液分配至新的培养瓶（皿）中，补足完全培养液；
4)盖上盖子，混匀，放入37℃，5%CO2培养箱中培养；
3.收培养基、胰酶等，75%酒精擦拭操作台面，关闭生物安全柜；
4.冲洗废液缸。
操作步骤
1.如单层培养那样（见方案21.8)将生长液中的细胞悬液以不同浓度加人到孔中。
2.以不同时间从三孔中取样0.4 ml，注意细胞要充满混匀以及完全分散成单个。
3.用电子细胞计数器汁数（见21.1.2节）或用血球计数器计数（见21.1.1节)。
4.计算每个样本的细胞浓度，像单层细胞生长一样以时间作对数线性作图（见21.9.3节）。细胞密度不适用于悬浮培养，因为它们不会贴附。
提示接种2个75 cm2培养瓶，每瓶20 ml不同农度的细胞悬液。按需要每天从瓶中取0.4 ml，但取样前要混匀细胞。培养瓶离开温箱的时间要尽量短，在画生长曲线期间不要换培养液。或者将培养瓶装在振荡器上（Techne，Integra，BeHco)，每天取样。如果用振荡培养瓶在一侧瓶口封膜，则不用从温室中取出培养瓶，也不用打开封口膜就可以取样，将膜面擦净，颠倒一下瓶子用注射器就可将液体吸出。
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