不同质量浓度水飞蓟宾对6种标准菌株的生长抑制曲线（二）
3、结果
3.1水飞蓟宾及同分异构体对标准菌株的MIC
结果见表1。水飞蓟宾对革兰阳性菌标准菌株的MIC为50～400μg/mL，对表皮葡萄球菌表现出最强的抑菌活性，MIC值为50μg/mL。水飞蓟宾对革兰阴性菌标准菌株的抑菌效果明显低于革兰阳性菌，MIC值＞400μg/mL；在水飞蓟宾的同分异构体中，仅异水飞蓟宾表现出对表皮葡萄球菌、屎肠球菌和粪肠球菌标准菌株有一定的抑菌活性（MIC为400μg/mL）。水飞蓟宾的抑菌活性明显高于其同分异构体。
3.2水飞蓟宾对临床分离菌株的MIC
结果见表2。水飞蓟宾对表皮葡萄球菌临床分离菌株的MIC值分布为＞400、400、200、100μg/mL，对应菌株占比分别为20.0%、40.0%、20.0%、20.0%；对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌临床分离菌株的MIC值分布为＞400、400μg/mL；对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌临床分离菌株的MIC值均＞400μg/mL。表皮葡萄球菌的MIC值分布与其他测试菌种比较，差异显著（P＜0.05）。
3.3抗生素对标准菌株和临床分离菌株的MIC
结果见表3和4。临床常用抗生素对标准菌株的MIC值符合CLSI对非苛养菌的MIC质量控制允许范围。
3.4水飞蓟宾对标准菌株的生长抑制曲线检测结果
结果见图1。对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌，培养液中水飞蓟宾浓度为0.5 MIC时菌体繁殖速度减慢；当药物浓度为1 MIC或2 MIC时菌体繁殖速度受到明显抑制，在培养的16 h内菌体浓度与初始浓度相比基本无变化。大肠埃希菌和铜绿假单胞菌生长曲线不受水飞蓟宾影响，在培养的16 h内与对照组的菌体数量及繁殖速度基本一致。
3.5水飞蓟宾与临床常用抗生素对标准菌株的联合抑菌效应
FIC值结果见表5。水飞蓟宾与青霉素联合，对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌有相加作用，对屎肠球菌和粪肠球菌是无关作用。水飞蓟宾与红霉素联合，对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌分别为协同和相加作用，对屎肠球菌和粪肠球菌是无关作用。水飞蓟宾与环丙沙星联合，对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均为拮抗作用。水飞蓟宾与庆大霉素联合，对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均为无关作用。
3.6水飞蓟宾与临床常用抗生素对临床分离菌株的联合抑菌效应
FIC值结果见表6和7。水飞蓟宾与青霉素联合，对表皮葡萄球菌和粪肠球菌的FIC值分布差异显著（P＜0.01），对表皮葡萄球菌主要是相加作用，对粪肠球菌主要是无关作用；菌种间FIC值分布的其余两两比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。水飞蓟宾与红霉素联合，对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌及屎肠球菌的FIC值分布差异均无统计学意义（P＞0.05）。水飞蓟宾与环丙沙星联合，对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的FIC值分布差异均无统计学意义（P＞0.05）；水飞蓟宾与庆大霉素联合，对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的FIC值分布差异均无统计学意义（P＞0.05）。
水飞蓟宾与青霉素联合对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌和粪肠球菌的FIC值分布，与水飞蓟宾与红霉素联合对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌和粪肠球菌的FIC值分布比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。水飞蓟宾与环丙沙星联合对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的FIC值分布，与水飞蓟宾与庆大霉素联合对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的FIC值分布比较，差异显著（P＜0.05），水飞蓟宾与环丙沙星联合对这2种细菌的联合抑菌效应均以拮抗为主，水飞蓟宾与庆大霉素联合对这2种细菌的联合抑菌效应均以无关为主。
4、讨论
抗生素滥用在医疗、食品安全、动物养殖和环境等方面引起的问题日趋严重。寻找并应用其他抗菌物质控制耐药性细菌或用于食品防腐逐渐引起关注。从天然植物中寻找抗菌资源，筛选抗菌药物越来越受到国内外学者的重视[16]。近年来水飞蓟素的抗菌活性逐渐引起了人们的关注[17-21]，但大多数研究是关于水飞蓟素混合物，而对单体的抑菌活性、抑菌谱及其与抗生素联合抑菌效应报道极少。
本实验结果显示，水飞蓟宾对临床常见感染细菌的抑菌活性明显高于其他同分异构体（异水飞蓟宾、水飞蓟亭和水飞蓟宁），表明水飞蓟宾为水飞蓟素的主要抑菌活性成分。黄酮类化合物的抑菌活性具有构效关系，分子中的电荷密度、A环羟基化与亲脂性取代基团能增强抑菌活性，分子结构中较多酚羟基，可与蛋白质、酶等以氢键结合而使其失去活性，从而起到抑菌的作用[6,11]。水飞蓟宾对革兰阳性试验菌的抑菌活性显著高于革兰阴性试验菌，这可能与细胞壁结构差异有关，水飞蓟素（宾）可破坏革兰阳性菌-金黄色葡萄球菌和粪肠球菌的细胞壁[12,18]。水飞蓟宾对表皮葡萄球菌的抑菌活性最强，标准菌株和临床分离菌株的MIC值分别为50μg/mL和100～400μg/mL；对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌的抑菌效果不佳，这些标准菌株和临床分离菌株的MIC值分别为400μg/mL和≥400μg/mL。Evren等[19]报道水飞蓟素对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌和粪肠球菌的MIC值为60～120μg/mL，水飞蓟宾占水飞蓟素的60%～70%，据此可推出水飞蓟宾对这些细菌的MIC值应低于60～120μg/mL。水飞蓟宾单体对这些细菌的MIC值明显高于水飞蓟素，这可能与水飞蓟素为含多种成分的混合物，存在协同抑菌作用及药物纯度有关。文献报道[6]甘草乙醇浸膏中甘草酸和甘草渣总黄酮具有协同抑菌作用。鉴于上述结果，本实验选用抑菌活性最好的水飞蓟宾进行后续实验。
本实验结果显示，水飞蓟宾对多重耐药菌的抑菌活性明显低于敏感菌株。这与Jung等[20]的研究结果存在较大差异。与标准菌株比较，水飞蓟宾对临床分离菌株显示较低的抑菌活性，在相同菌种临床分离菌株间MIC也存在较大差异，这可能主要是因为菌株间存在不同耐药机制，如细菌同时产生多种抗生素水解酶、钝化酶、修饰酶，或存在外排泵系统，或药物作用靶位改变等，这些都可使药物的抑菌作用降低。
本实验结果表明，水飞蓟宾对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌的生长都有明显抑制作用，抑制效果随药物质量浓度的增加而增加。水飞蓟宾对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的生长没有抑制作用。这也验证了水飞蓟宾能抑制革兰阳性菌生长，而对革兰阴性菌生长无抑制作用。
临床上中西药联合应用较为广泛，中药和化学药联合应用可取长补短利于疾病治疗、减少耐药菌发生、降低或减少毒副作用。联合药敏实验结果表明，对革兰阳性试验菌，水飞蓟宾与青霉素/红霉素联合抑菌效应以相加和无关作用为主，无协同和拮抗作用。水飞蓟宾与青霉素/红霉素联合用药，对青霉素/红霉素耐药的菌株，不能降低细菌对青霉素/红霉素的耐药程度和使其耐药性逆转；但对青霉素/红霉素敏感的菌株，可降低青霉素/红霉素的临床用药剂量，降低或减少毒副作用与不良反应。对革兰阴性试验菌，水飞蓟宾与环丙沙星联合抑菌效应以拮抗作用为主，无协同和相加作用。水飞蓟宾与环丙沙星联合用药，不仅不能降低环丙沙星耐药菌株对环丙沙星的抗药性，反而增加其抗药性；对环丙沙星敏感菌株，需增加环丙沙星的临床用药剂量，更易引起毒副作用或不良反应。水飞蓟宾与庆大霉素联合抑菌效应以无关作用为主，少数可产生拮抗作用，无协同和相加作用。水飞蓟宾与庆大霉素联合用药，不能降低庆大霉素耐药菌株的耐药程度和使其耐药性逆转，有可能增强其抗药性；对庆大霉素敏感菌株，不能降低庆大霉素的临床用药剂量，致水飞蓟宾的无意义用药。但水飞蓟宾可减少庆大霉素产生的活性氧，减轻其引起的肾脏毒性。