鸭瘟病毒DEV gG 基因缺失株的构建、体外生长曲线和蚀斑形成能力测定
鸭瘟病毒（DEV）是引起鸭高致死率的重要病原。为探究gG基因对DEV疫苗株免疫保护效果的影响，本研究在本实验室已构建的DEV疫苗株细菌人工染色体感染性克隆pDEV-EF1的基础上，通过“Red E/T两步重组”技术，构建DEV gG基因缺失的感染性克隆pDEV-ΔgG，对其进行酶切、PCR及测序鉴定。将pDEV-EF1和pDEV-ΔgG分别转染CEF细胞，待两组细胞均出现荧光后，收获细胞培养物反复冻融3次后，连续传至20代，每隔5代采用PCR及测序鉴定，分析pDEV-ΔgG的遗传稳定性，并采用western blot进一步鉴定，结果显示，正确构建gG基因缺失株，且能在CEF上稳定传代，命名为rDEV-ΔgG。将rDEV-ΔgG和亲本病毒rDEV-EF1接种CEF，测定体外生长曲线和测定蚀斑形成能力。
结果显示，rDEV-ΔgG和rDEV-EF1的病毒滴度在24 h~72 h呈上升趋势，均在72 h时达到高峰，且二者的病毒滴度无显著差异；rDEV-ΔgG感染CEF后形成的蚀斑较亲本病毒rDEVEF1产生的蚀斑面积减小27.37%。将rDEV-ΔgG以不同剂量免疫30日龄麻鸭2周后，进行DEV攻毒试验，观察各组鸭的临床症状，统计各组麻鸭的存活率，攻毒后1 d到9 d采集各组鸭肛拭子，并在攻毒后2 d、4 d、6 d和8 d各组分别随机剖杀3只麻鸭，取其各脏器组织，经荧光定量PCR分别检测各组麻鸭各脏器病毒载量及排毒情况。攻毒试验结果显示，1.0×105 TCID50和1.0×104 TCID50 rDEV-ΔgG免疫的麻鸭在强毒攻击下的保护率较相同剂量rDEV-EF1免疫的麻鸭均下降17%。
各脏器病毒载量结果显示，在攻毒后2 d麻鸭胸腺的病毒载量最高，其次是脾脏，在攻毒后4 d，麻鸭食道、泄殖腔、胸腺病毒载量较高。泄殖腔排毒结果显示，攻毒后1 d~4 d泄殖腔排毒量持续升高，并攻毒后4 d各组麻鸭的排毒量达到峰值。本研究比较了gG基因缺失病毒rDEV-ΔgG和亲本病毒rDEV-EF1的生物学特性和免疫保护效果差异，为明确gG在DEV基因组中的功能提供研究基础。