不同浓度巴西苏木素对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌生长及抑制作用（三）
2结果
2.1菌株药敏检测结果
药敏检测结果显示，10株CRABA对哌拉西林、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素耐药率为100%，对多黏菌素耐药率为0。
2.2 MIC、MBC测定结果
苏木萃取液对10株CRABA的MIC均为15.63 mg/mL，MBC均为15.63 mg/mL。巴西苏木素对10株CRABA的MIC均为0.500 0 mg/mL，MBC均为0.500 0 mg/mL。原苏木素B对10株CRABA的MIC均无效。
2.3苏木组分高效液相图谱
DMSO的高效液相图谱见图1，苏木萃取液的高效液相图谱见图2，巴西苏木素的高效液相图谱见图3，说明苏木萃取液中产生抑菌作用的组分为巴西苏木素。
2.4巴西苏木素对CRABA生长的影响
巴西苏木素药物浓度越大，其对CRABA的抑制生长作用越强，见图4。
图4巴西苏木素对CRABA生长的影响
2.5 SDS-PAGE图谱
随着巴西苏木素浓度的增大，其对CRABA的分泌蛋白抑制作用越强，见图5。
2.6巴西苏木素与美罗培南联合用药细菌生长抑制结果
美罗培南对CRABA的MIC为0.128 mg/mL，FIC指数为0.75，为相加作用，见表2、3。
3讨论
近年来随着碳青霉烯类药物的广泛使用，耐碳青霉烯类革兰阴性菌感染日益突出，其中CRABA所致感染的发生率和死亡率均较高，治疗难度较大。CRABA对多粘菌素B的敏感性最高，耐药率为1.4%，但因其肾脏和神经毒性作用，临床甚少使用。CRABA对头孢哌酮-舒巴坦、米诺环素、左氧氟沙星和阿米卡星的耐药率分别为33.0%、42.2%、45.5%和40.2%。对头孢他啶、亚胺培南、美罗培南和环丙沙星等耐药率均在50%以上。目前针对CRABA感染的治疗手段非常有限，主要是头孢哌酮-舒巴坦、喹诺酮类和氨基糖苷类药物。因此，针对CRABA探索新型药物已成为研究的热点。
苏木的主要活性成分为生物碱，研究表明其中的巴西苏木素在抗菌中起主要作用。LANE等发现巴西苏木素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为14.85 mm，MIC为12.5μg/mL。SYAMSUNARNO等发现苏木中的巴西苏木素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及其他菌种具有很强的抑制作用，MIC为4～32μg/mL。因此，本研究探讨了苏木活性成分对CRABA的体外抑菌作用，为中药抑菌研究提供理论支持。
既往研究发现，大部分抑菌的中药对细菌的生长和蛋白谱的表达均有影响，本试验也获得了相似的结果。在不同浓度巴西苏木素作用下，CRABA的生长受到明显抑制，细菌可溶性蛋白表达发生了明显变化，说明巴西苏木素对CRABA的抑菌作用可能与其影响细菌生长、蛋白质的表达有关，其机制还需要进一步研究。
目前中药很少系统地被应用于临床，其主要原因在于中药对细菌的抑制作用弱于常用抗菌药物。然而有研究表明，某些中药与抗菌药物联用可以产生明显的增效作用，因此，中药与抗菌药物联用成为新的研究思路。本研究创新性地将巴西苏木素和美罗培南进行联合用药试验以观测对CRABA的抑制作用，发现二者联合用药与单药比较，抑菌效果得到了明显增强。本研究虽然证实巴西苏木素与美罗培南对CRABA有相加效应，但从体外抑菌试验结果分析，巴西苏木素与美罗培南联合用药要达到完全抑菌效果，巴西苏木素药物浓度较低时，美罗培南仍需较高浓度，如何使二者联用发挥更好的抑菌作用，尚需进一步研究。
综上所述，中药抗菌具有较好的前景，贯穿于抗菌的各个环节。一方面，中药可以直接作用于微生物本身，破坏细菌细胞壁和细胞膜的完整性改变细胞通透性、抑制细菌生物被膜的形成。另一方面，通过逆转细菌耐药性，促进其他药物的杀菌作用，如抑制耐药菌外排泵、消除耐药质粒R。本研究不足之处在于：(1)所采用菌株数量较少，且其药敏检测结果相同，故10株菌所得到的结果也完全相同，虽然表明研究的重复性较好，但所得结果不能证明巴西苏木素对耐药性不同的CRABA都有很好的抗菌作用，其结果存在一定的偏倚，为临床提供的帮助存在局限性。(2)未对其他抑菌机制展开研究，且仅处于体外试验阶段，不能有效评价巴西苏木素在体内的疗效。因此，未来将进一步展开试验以探讨巴西苏木素抑菌作用的机制，为体外试验、临床试验及应用提供理论依据，使巴西苏木素的抑菌活性得到真正发挥。
不同浓度巴西苏木素对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌生长及抑制作用（一）
不同浓度巴西苏木素对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌生长及抑制作用（二）
不同浓度巴西苏木素对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌生长及抑制作用（三）
丹麦Biosense微生物生长动态监测系统oCelloScope是一款直接法测生长曲线的仪器。oCelloScope主要应用：
1、抗菌药敏试验（AST）/MIC测定：通过实时动态成像，可以动态、实时地观察、拍照、摄像不同类型的致病菌的动态生长和测量生长曲线，并能同时计数微生物的菌落数。
2、自动监测真菌的生长和萌发过程：多孔微孔板（96孔）中实时记录图像来实现评估青霉菌（真菌）的生长和形态变化，给出真菌的动态生长和测量生长曲线。
3、监测孢子萌发：可自动监测孢子的萌发及孢子发芽过程。
4、追踪微生物细胞形态变化：能够分析和跟踪细胞形态的变化，系统包含一种基于细菌平均长度分割提取的杆状细菌成丝监测算法。
5、研究生物膜的非静态动力学和形态学：用于研究真菌、细菌和生物膜的非静态动力学和形态学。
6、食品防霉防腐的优化研究： 筛选出对各种食品败霉菌的抗菌剂及对乳酸菌产生的化合物对真菌的抗真菌活性筛选。
7、新药研发：开发新药或研究如何使用多种药物组合来抑制真菌和细菌的生长。
8、药剂学研究：评估水溶性差的药物的沉淀动力学，监测药物从过饱和溶液中的沉淀随时间的变化过程。
9、量化细胞水平的变化：超高的灵敏度，系统能够深入了解细胞动态生长过程，因为单细胞水平的变化是量化的。
10、复杂样品分析及微生物形态鉴别：通过内置的划分算法，能够自动执行单细胞分析，并在复杂样品中区分和表征不同细胞类型的动力学。