鼠疫耶尔森氏菌在3种选择培养基生长能力的测定——结果、结论
2结果
2.1鼠疫菌在3种选择培养基的生长情况及特异性
检测1号培养基中的鼠疫耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌生长良好，均为玫红色菌落，鼠疫菌发育成熟，菌落中心呈淡红色(见图1)。金黄色葡萄球菌和链球菌不生长，大肠埃希氏菌生长受抑制，菌落计数少。变形杆菌的弥漫性生长受抑制，呈单个菌落;2号培养基可见大肠埃希氏菌生长，其它各实验菌株生长均受抑制;鼠疫菌在龙胆紫培养基上生长，菌落稍隆起，半透明略带蓝灰色，镜下观察鼠疫菌菌落形态不典型，生长缓慢，变形杆菌在龙胆紫培养基上生长受抑制，呈单个菌落，大肠埃希氏菌长满整个平板。结果见表1。
图1鼠疫菌在选择培养基和赫氏培养基中生长情况
表1鼠疫菌在4种培养基生长情况
2.2选择敏感培养基敏感性的测定
鼠疫菌在龙胆紫培养基和2号培养基敏感性差，鼠疫EV菌液浓度为10－7时，未见鼠疫菌生长，1号培养基在10－8时依然有菌生长，其敏感性与赫氏培养基一致，见表2。
表2鼠疫耶尔森氏菌在各培养基敏感性检测结果
2.3脏器检验结果
应用选择培养基检测腐败材料中鼠疫菌，结果见表3。
表3选择培养基检测腐败材料结果
3结论
鼠疫菌的分离是所有鼠疫预防和控制工作的前提和核心，对于任何从鼠疫监测现场带回的鼠疫宿主动物或动物遗骸，鼠疫专业人员会尽一切努力分离鼠疫菌，并保存鼠疫菌种，分离鼠疫菌的基础是选择适合的培养基并能快速挑选目的菌。传统分离鼠疫基础培养基是赫氏培养基，鼠疫菌在赫氏培养基上通过低倍显微镜能见灰白色小菌落，镜下可见菌落中心隆起、表面有黄褐色粗糙颗粒，边缘不整齐呈薄而透明的花边状，为典型鼠疫菌成熟菌落形态，这需要专业人员凭丰富的经验、扎实的专业知识来辨别鼠疫菌并根据鼠疫菌噬菌体裂解实验来确定鼠疫菌。但在实际工作中，由于鼠疫菌在不同因素影响下其形态表现为多样性;自然界存在不被噬菌体裂解的鼠疫菌，因此仅从菌落形态及噬菌体裂解实验进行判断易漏诊。本研究是结合鼠疫菌特异性酶的特征，在赫氏消化液基础上研制鼠疫菌选择敏感培养基，这其中，赫氏消化液用于增菌，1号培养基含0.5%胆盐，具有高度特异性，含有甘露醇同时具有鉴别作用。
通过对3种选择培养基敏感性和特异性检测，可以看出3种选择培养基中，龙胆紫培养基和1号培养基对鼠疫菌的生长和选择能达到基本检出的要求，1号培养基可以检出10－1个菌/m L，敏感性高于龙胆紫培养基，与基础培养基无统计学差异(P值和统计方法)。鼠疫菌株在1号培养基经28℃培养24 h即可生长发育成熟，菌落呈玫红色，具备鼠疫菌典型结构(菌落花边大，中央颗粒粗糙)，变形杆菌、大肠埃希氏菌及革兰氏阳性杆菌生长均受抑制，结果显示该培养基特异性好。龙胆紫培养基是分离鼠疫菌常用选择性培养基，可以抑制变形杆菌和革兰氏阳性菌，但大肠埃希氏菌在该培养基上生长良好，并且抑制鼠疫菌的正常生长，据此龙胆紫选择培养基在野外污染严重材料的鼠疫菌培养中应用不理想，只适于实验室动物感染试验或污染不严重时鼠疫菌的分离，例如在鼠疫菌的毒力测定等实验，鼠疫菌在2号培养基生长发育差，菌落呈灰白色，与其它杂菌不易区分，不适于鼠疫菌分离培养。
3种选择培养基应用于动物疫情的检测，1号培养基与龙胆紫培养基的检出结果符合率为100%。由于野外动物材料腐败，其中01和04旱獭只剩股骨残骸，对照培养基各脏器变形杆菌弥漫性生长，覆盖少许鼠疫菌，导致分离困难，应用1号选择培养可抑制变形杆菌弥漫性生长，玫红色鼠疫菌生长良好，极易挑选。龙胆紫培养基上鼠疫菌亦可检出，但生长缓慢，培养24～48 h依然为初级菌落。狗脏器培养显示携带噬菌体合并杂菌污染，赫氏培养基上无法挑选鼠疫菌，通常需应用抗噬菌体血清培养基分离鼠疫菌，但在野外无法制备，本研究应用1号选择敏感培养基，鼠疫菌24 h发育成熟，菌落呈玫红色，结构典型，能抑制杂菌生长，鼠疫菌易于挑选，不足之处在于鼠疫菌分离后依然携带噬菌体，所以分离后需在专业实验室进行抗噬菌体血清培养基进一步分离培养后菌株方能保存。实际检测可看出1号培养基效果优于龙胆紫培养基。
01号培养基是笔者自主研发的显色培养基，该培养基是利用显色培养基的原理，使用中性红为显色底物，在鼠疫菌特异性酶作用下酵解甘露醇产酸，中性红指示剂在酸性环境中产生红色集团附着于菌落上，使鼠疫菌菌落显示红色，同时添加抑制变形杆菌和革兰氏阳性菌的试剂，十二烷基硫酸钠，红霉素，胆盐3号，阿莫西林，对变形杆菌、大肠杆菌和革兰氏阳性菌抑制作用强，适用于检验腐败和杂菌污染的动物材料，而且生长的鼠疫菌菌落典型，易于挑选，在野外材料鼠疫菌分离有实际意义，使用该培养基应注意耶尔森氏菌属中与鼠疫菌近源的假结核杆菌、小肠结肠炎菌都具有能发酵甘露醇的特异性酶，在实际应用中分离疑似菌后应做噬菌体裂解实验和鼠疫核酸检测以确证。