犬奇异变形杆菌及其噬菌体分离鉴定、生长曲线及药敏试验（一）
奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）是一种无荚膜、无芽孢、有鞭毛和菌毛的革兰氏阴性杆状细菌，是变形杆菌属中最重要的病原菌之一。以产生脲酶和固体培养基上形成典型的迁徙运动能力而闻名。奇异变形杆菌是一种腐生性的条件致病菌，分布较广，可存在于多种环境中，常见于土壤、污水、动物体表、肠道等部位，能够引起人和动物伤口、眼睛、呼吸道、胃肠道和尿道等感染。奇异变形杆菌是继大肠杆菌之后最易引发人泌尿道感染的细菌，可引起严重的泌尿道组织学损伤并与膀胱和肾脏结石的形成有关。
近年来，奇异变形杆菌作为人兽共患的病原菌，除了能够感染人以外，还能感染鸡、猪、山羊、水貂、狐狸、恒河猴等多种动物，造成严重的经济损失。同时，奇异变形杆菌被证明能够抵抗多种抗生素和获得能够生产β-内酰胺酶拓展谱的能力，导致严重的公共卫生问题。
噬菌体广泛存在于自然界，是一类可以感染并裂解细菌的病毒。噬菌体具有极强的宿主特异性，除对宿主菌具有裂解作用，不会感染其他正常菌群，对人和动物无害。近年来，噬菌体在防治人和动物疾病、农业生产、食源性感染防治应用广泛。特别是作为一种抗生素替代物或补充治疗方法，在控制病原菌的传播以及治疗耐药性细菌感染等方面取得了巨大的进展。在当下耐药菌株不断出现、新型抗菌药物研发进展缓慢的状况下，噬菌体可作为治疗感染性疾病的手段再次引起人们的关注。
前期研究从城市居民区生活污水中分离出4株奇异变形杆菌的噬菌体，并对其生物学特性进行研究，表明其具有较好的特异性和裂解活性。周祥莹等以貉源奇异变形杆菌为宿主菌分离出噬菌体，验证其体外裂解活性，为貉奇异变形杆菌病的防治提供了基础。研究从感染性结石犬的尿液中分离到致病菌，通过形态特征、培养特征、16S rRNA测序等，判定为奇异变形杆菌，并具有较强的耐药性。再以分离菌株为宿主菌，从污水中分离裂解性噬菌体，命名为vB_PmM_XNR，对其生物学特性进行研究，同时评价裂解性噬菌体对奇异变形杆菌的体外裂解活性，以期为治疗和控制奇异变形杆菌感染和研制新型抗菌制剂奠定基础。
1材料与方法
1.1主要药品与试剂
LB培养基、营养肉汤、Baird-Parker琼脂培养基、亚碲酸钠卵黄增菌液、尿素酶琼脂基础培养基购自海博（青岛）生物技术有限公司；细菌基因组提取、DNA纯化回收试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司；药敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司；革兰氏染色试剂盒、透析袋购自索莱宝（北京）科技有限公司；DNA Ladder Marker、PCR Mix，购自近岸蛋白质科技有限公司；其他常规试剂均为分析纯。聚乙二醇8000购自生工生物工程（上海）股份有限公司。
电热恒温培养箱（上海森信实验仪器有限公司）；低温冷离心机（德国艾本德股份公司）；JEM-2100 Plus透射电子显微镜（日本电子株式会社）；Bio-Rad S1000TMPCR仪（美国BIO-RAD S1000）。
1.2细菌分离及生物学特性分析
1.2.1细菌分离
病料采自于大庆市农大动物医院。无菌采取犬膀胱尿液，2 000 r·min-1离心5 min，弃去尿液上清液，将沉淀物接种于Baird-Parker琼脂培养基和血琼脂固体培养基上，置37℃培养24 h后，挑取典型菌落进行分离纯化，染色镜检。
为了进一步观察分离菌株的形态特征，取纯化的菌液10μL（105CFU·mL-1）置于铜网，静置15 min左右，用滤纸吸干多余液体，用负染液（2%磷钨酸溶液）染色5 min，滤纸吸干染液后，用蒸馏水清洗2遍，干燥后置于透射电镜（JEM-2100 Plus，JEOL，日本）观察。
1.2.2溶血能力检测
将分离纯化的细菌划线接种到新鲜配置的血琼脂培养基（脱纤维羊血5%），置于37℃恒温培养24～48 h，观察细菌。
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