不同温度下杀鲑气单胞菌的生长曲线
选择从养殖生产系统分离出的杀鲑气单胞菌菌株,进行了不同温度及pH条件下的生长实验研究,绘制了不同条件下杀鲑气单胞菌的生长曲线,阐明了温度及pH对其生长的影响,为在养殖生产过程中通过调控水体温度及pH等环境因子,抑制杀鲑气单胞菌生长,降低养殖鱼类发病率提供了理论依据。
不同温度下杀鲑气单胞菌生长实验
取1.3.1中所述种子液,按5%接种量接种于300 mL无菌LB液体培养基中,充分摇匀后分装成3份,于28℃下静置培养,每隔2 h取样,以无菌LB液体培养基作对照,用紫外分光光度计检测菌液A600值,同时另取菌液进行梯度稀释,于2216E琼脂平板涂布计数,统计数据,绘制其在该温度下的生长曲线。其他温度(15、10、5℃)梯度条件下实验方法类同。
不同温度下杀鲑气单胞菌的生长曲线
本实验采用了A值法与平板计数法相结合的方式,对杀鲑气单胞菌生长曲线进行测定。结果显示,在细菌对数生长期,两种方法测得的生长曲线变化趋势基本一致,但在细菌对数生长期之后,菌液A值会继续增加,而平板计数法显示细菌生长已进入稳定期甚至已经开始衰亡(图1)。对两种方法进行比较发现,在细菌生长对数期之后,平板计数法更能真实反映细菌生长状态(详见3.2)。实验发现,不同温度下杀鲑气单胞菌生长曲线差异较大(图2)。随着培养温度的降低,杀鲑气单胞菌生长速率下降。当培养温度为28℃时,杀鲑气单胞菌在2h后就进入了对数生长期,并在8 h左右达到数量高峰期,为6.6×108CFU/mL。20 h之后,CFU对数值显示其数量开始下降(图1a)。培养温度为15℃时,该菌在6 h之后进入快速增长期,从CFU对数值可以看出,在48 h左右细菌生长进入稳定期(图1b)。当温度降低到10℃时,其生长速率进一步降低(图1c),14 h左右生长速率加快,54 h趋于稳定。而当温度降低到5℃时,在36 h之内,杀鲑气单胞菌数量无显著变化。经统计分析发现,在实验第24小时和第48小时,各温度组杀鲑气单胞菌数量均出现显著差异(P<0.05);在第72小时,15℃及5℃条件下杀鲑气单胞菌数量差异显著(P<0.05),说明随温度降低,杀鲑气单胞菌生长速率显著降低(图3)。
图1不同温度下杀鲑气单胞菌生长曲线
图2不同温度下杀鲑气单胞菌生长曲线的比较
图3杀鲑气单胞菌在不同温度下培养24、48、72h的细菌对数值