生活饮用水菌落总数测定方法及影响因素（二）
5.样品重复性测定
在微生物检验中，样品中细菌分布的均匀性和重复测定带来的误差是影响检测结果的主要因素之一。根据潍坊地区水质的特点，对三种细菌密度的水样进行测定。
（1）质控样品的重复性测定
采用美国IDEXX公司生产的HPC/TVC（E.faecalis）质控样品，真值20 CFU/mL，可接受范围2～38 CFU/mL，重复检测20次，检测结果如表2所示。
平板间误差规定要求≤10%，但在实际工作中有时不易达到。从表2中可以看出，最大值与最小值的误差为28.57%，大于10%，但20次检测结果均接近于真值，相对标准偏差为9.72%。周红雨曾在《泊松分布应用于菌落总数质量控制》一文中阐明，当时，平行平板a1、a2之间的计数结果较理想。从表2中可知，20组数据符合泊松分布，最大值为24 CFU/mL，最小值为18CFU/mL，符合上述公式。因此，在实际检测工作中，当菌落总数测定值为10～30 CFU/mL时，可以用判定平行平板检测结果的准确性。
表2质控样品重复测定结果
表3菌落总数较低时，水样品菌落总数重复性测定结果
表4菌落总数较高水样品菌落总数重复性测定结果
（2）水样品重复性测定
在日常水质监督检测时，由于各县市区水质特点、生产工艺等有所差别，因此出厂水及管网水的菌落总数结果各有不同。通过对2010—2014年潍坊地区生活饮用水卫生状况进行监测，发现大多数水厂消毒较好，菌落总数检测结果在30 CFU/mL以下，甚至有些水厂的出厂水、管网水菌落总数未检出，只有个别水厂水样结果偏高甚至出现超标情况。结合工作实际，对这两种情况的重复性分别分析，初步确定平行平板间的判定标准，为以后的工作提供参考。
①菌落计数结果小于10CFU/mL时的重复性
在生活饮用水菌落总数测定时，菌落总数结果较低，此时重复性测定如表3所示。
根据北欧标准规定，自身同一梯度平行加样两皿间的相对误差小于7.7%。但是，实际工作有时很难达到此标准，特别是在菌落总数较低时，如表3中的数据显示，菌落总数均小于10 CFU/mL，相对标准偏差达到38.25%。然而通过计算可知，表3中数据符合，并且Grubbs检验后均无异常值。因此，菌落总数测定结果小于10 CFU/mL时，可以用判定平行平板检测结果的准确性。
②菌落计数结果为30～300CFU/mL时的重复性
将峡山水库水样稀释10倍，重复测定20次，以此反映菌落总数结果较高时的重复性，仅供参考。结果如表4所示。
从表4中可以看出，菌落计数结果在30～300 CFU/mL时，相对标准偏差为4.4%，符合北欧标准。而且通过计算可知，表4数据符合，经Grubbs检验后均无异常值。可见，菌落总数较高时精密度较高，结果更准确。当菌落计数结果在30～300 CFU/mL之间时，可以用a1+判定平行平板检测结果的准确性。
三、结论
①在生活饮用水菌落总数质控过程中，除了设施环境、培养基、培养箱温度等硬件需满足要求外，样品重复性、检测时间、培养时间、检测人员读数等也是影响结果的主要因素，不同人员对同一平板读数引起的误差较小，在实际工作中可以作为次要因素考虑。
②检测时间和培养时间是质量控制的主要因素之一，应严格规范操作。微生物水样的运输及保存均应冷藏，样品取来后应立即检测，最长不宜超过24 h。
③培养时间因样品细菌种类的纯度对结果的影响有所不同。对于细菌种类单一的质控样品，随着培养时间的增长，其结果没有明显的变化；而对于种类复杂的水样品，培养时间对其结果的影响较大，培养时间最好控制在48±2 h。
④菌落总数的高低可能会导致重复性的不同。计数结果在30～300 CFU/mL之间时，精密度为4.4%，重复性好；计数结果较低（小于10 CFU/mL）时，精密度为38.25%，重复性较差；计数结果在10～30 CFU/mL之间时，精密度为9.72%，重复性较好。
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