豆豉纤溶酶产酶菌株生长曲线与产酶曲线
豆豉纤溶酶(douchi fibrinolytic enzyme，DFE)是我国学者从传统发酵食品豆豉中分离得到的一种丝氨酸蛋白酶。有研究表明，该酶是一种新型纤溶酶，不仅具有半衰期长、纤溶活性高、安全无毒、口服效率高等优点，还可弥补目前临床上治疗血栓性疾病使用的溶栓剂如尿激酶和链激酶半衰期短、成本高、效率低等不足。因此，通过各种微生物来源的纤溶酶治疗血栓新型药物的研究开发受到世界各国学者的重视。
本研究以市售水豆豉为原材料，采用平板法初筛和化学法复筛相结合的方法，旨在筛选出1株活性较高的豆豉纤溶酶产酶菌株，为将水豆豉及相关发酵产品研发成具有溶栓作用的健康产品提供了备选菌株及理论依据。
样品来源
在四川、云南和贵州省收集11种水豆豉样品，收集后的样品立即进行细菌分离培养，并将剩余样品存于灭菌均质袋中，-80℃冰箱保存。
细菌生长性能测定
将已鉴定的菌株复苏后每2 h吸取一定量菌液，用酶标仪在600 nm下检测其OD值，至28 h结束，绘制菌株的生长曲线；另每2 h吸取一定量菌液离心后取其上清液，过0.22μm滤膜后检测豆豉纤溶酶含量，至28 h结束，绘制菌株的产酶曲线。
B61菌株生长曲线及产酶曲线
为了考察B61菌株的生长能力及产酶能力，绘制其生长曲线及产酶曲线，结果见图4。可见菌株生长2 h后便进入对数期，生长14 h后进入稳定期，18 h后进入衰亡期。菌株生长6 h后可检测到豆豉纤溶酶活性，生长到16 h时酶活性达到最高，为826.25 IU/mL，继而稳定至20 h，然后缓慢下降。产酶曲线与生长曲线具有一定的同步性。
B61的生长曲线与产酶曲线
讨论
本研究以收集云、贵、川地区水豆豉为原材料，利用不同培养基对分离菌株进行产酶能力的初步筛选，平板法发现细菌产蛋白酶、淀粉酶、豆豉纤溶酶的比例分别为98.7%、83.5%、98.7%。再从中选择产酶能力较强的6株菌进行化学法复筛，得到产酶能力最强的菌株B61，经鉴定为贝莱斯芽孢杆菌。该菌是Ruiz-Garcia等于2005年新命名的芽孢杆菌种，随后被Wang等确定为解淀粉芽孢杆菌的后期异型体。所以贝莱斯芽孢杆菌与解淀粉芽孢杆菌的亲缘性较近，但目前未见能将二者分开的生化反应标准，第八版的伯杰细菌手册中，也未见具体描述贝莱斯芽孢杆菌的生化反应。
Fan B等于2007年提出贝莱斯芽孢杆菌与解淀粉芽孢杆菌在ANI和dDDH上的区别是在区分物种的界值以下的，所以建议都纳入解淀粉芽孢杆菌组。因此，在GenBank中，贝莱斯芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌也均属于Bacillusamyloliquefaciens。Hee C B等对解淀粉芽孢杆菌组的3个菌种基因进行了分析，发现贝莱斯芽孢杆菌富含次生代谢产物合成的相关基因，也有更多参与抑菌化合物合成的基因。
目前关于贝莱斯芽孢杆菌产豆豉纤溶酶能力的相关发现较少，仅查看2019年Yao Z等从传统海鲜发酵物中分离到1株产豆豉纤溶酶的贝莱斯芽孢杆菌。在本研究中，该贝莱斯芽孢杆菌的生长曲线2～14 h为对数生长期。
不同文献中同一种菌的生长曲线略有差异，吴拥军等报道枯草芽孢杆菌的对数生长期为5～10 h，解淀粉芽孢杆菌为2～16 h，与贝莱斯芽孢杆菌接近。张旭等报道解淀粉芽孢杆菌的豆豉纤溶酶活性在2 h即能检测出，在24 h达到最大值，而本研究中，6 h可检测到豆豉纤溶酶活性，16 h达到最大活性，造成差异的可能原因是该文献采用的化学法，检出限相对于平板法较低。
相关新闻推荐
1、RIP 衍生物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生长曲线及生物膜形成的影响（一）
2、纳米材料Cu2-xSe NCs可在1 h内杀死所有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌、革兰氏阳性菌