菌落计数仪的计数和培养步骤、稀释标准及注意事项
菌落形成单位CFU（colony forming unit）用来估算固体或液体样品中存活的细菌或真菌细胞数量的单位，通常以CFU/g或CFU/mL的形式表示。活菌数用CFU表示，表示在适宜的环境条件下，在固体培养基上生长繁殖所形成的菌落数。但，菌落形成单位CFU并不等于实际活菌数，而是对活菌数的估值。单菌落有可能由一个菌生长繁殖而成，也可能由多个菌生长繁殖而成，所以有必要用到一些仪器，比如：BioSense微生物快速立体计数仪。
样品的稀释固体和半固体样品
称取25 g置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1min～2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。
液体样品以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
上步完成后，用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。移液过程使用的器具，都应避免微生物污染。使用耐高压移液枪，核查洗耳球无菌程度，避免移液枪触及均质袋或试管内壁……样品匀液完成后，可按相同操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
之后，及时将15 mL～20 mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。培养和计数
样品稀释完成后，就要进行培养和菌落计数了。
待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按相同条件进行培养。
培养完成后，就要进行菌落计数了，计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units,CFU）表示。
选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
大片菌落其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。链状生长当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
结果与报告
为了生成结果和报告，需要根据计数结果和公式计算出菌落总数。需要注意的是，对于菌落数量不同的培养皿，计数原则有所不同。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
按照什么标准去稀释？
1.参考值
其实，这个是最靠谱的方法，有个参考值就可以直接稀释后涂布。这里的“参考值”有可能是估值，也可能是样品本身标注的值。对于有经验的人，其实有没有参考值，总是能够计数。但，对于新手来说，如果没有，根本无从下手。
2.扩大计数范围
比如，稀释到10-8，感觉稀释倍数差不多，涂布的时候选择10-8，10-7，10-6，每个梯度三个平板。再选择10-9，10-5，10-4，每个梯度一个平板，留个对照。即使菌落数计不出来，也能出个参考值、估测值。
3.巧妙利用光学显微镜
比如，稀释到10-8，感觉稀释倍数差不多，采用单染色法，在显微镜下观察，如果没有观察到菌，稀释倍数往前数；如果能够观察到1～5个菌，就按照这个稀释倍数；如果大于5个菌，继续稀释一个梯度；如果看到一片，你清楚怎么处理。
4.巧妙利用血球计数板
比如，稀释到10-8，感觉稀释倍数差不多，用血球计数板大概看一下菌数，推算菌落总数，看是否符合计数要求。
注意事项
1.巧妙利用玻璃珠进行研磨，即使是液体样品也需要进行研磨，尽量将菌落打散。
2.尽量涂布均匀，覆盖整个平板表面。实在涂不好，可以选择倾注。
3.能用试管稀释就不要用离心管稀释。
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