产脂肪酶地衣芽孢杆菌LD-1302筛选、培养基及产酶条件研究（五）
2.8盐度对LD-1302产酶的优化
由图8可知：以橄榄油为有机碳源、接种量为3.75×105CFU/mL、pH 8、37℃时，菌株LD-1302在盐度32时有最大脂肪酶活，为（34.97±1.45）U/mL。采用SPSS 18.0统计软件分析数据可知：盐度、时间的P=0.00<0.01，表明盐度、时间均对酶活影响极显著；由盐度-酶活的同类子集结果可知：盐度36时酶活均值为22.88 U/mL；盐度28、30、34时酶活均值分别为25.71U/mL、28.60U/mL、27.29U/mL，在同一子集中，表明三者对产脂肪酶活无明显差异，但产脂肪酶活效果略优于前者；盐度32时酶活均值为30.59 U/mL，且与前四者分属不同子集，表明盐度32时，产脂肪酶活效果最好；由时间-酶活的同类子集结果可知：24 h、48 h、72 h时酶活均值分别为27.72U/mL、30.65U/mL、22.68U/mL，分属不同子集，表明三者对酶活的影响有明显差异，且培养时间为48 h时，产脂肪酶活效果最好。随着盐度的增加或减少，菌株LD-1302的产脂肪酶活性都有一定程度的降低，尤其是随盐度的增加，脂肪酶活下降较为显著。
图8盐度对LD-1302利用橄榄油产脂肪酶的影响
3讨论
本研究采用高温水浴法从海南热带海水中筛选得到产脂肪酶活性较高的地衣芽孢杆菌LD-1302。当前，已报道的产脂肪酶芽孢杆菌主要有枯草芽孢杆菌、芽孢杆菌B5-12、芽孢杆菌WF63、蜡样芽孢杆菌B.cereus等（胡德朋等，2008；刘秀花等，2006；黄鹭强等，2010；Akanbi et al.2010），其脂肪酶活依次为2.8 U/mL、24.8U/mL、6.33U/mL、2.51 U/mL，均低于菌株LD-1302的酶活。菌株LD-1302最适应用于盐度32、pH 8、温度37℃的海水环境，在盐度28～36、pH 5～9、27℃～47℃的海水条件下也存在较稳定产脂肪酶活性，并可在蔗糖等速效碳源及橄榄油、椰子油和葵花籽油等有机碳源的诱导下产较高脂肪酶活，这与本研究基于海水环境下筛选产脂肪酶活性菌株并在该环境条件下阐述影响其产酶活性的主要环境因素直接相关。
有关学者筛选的产脂肪酶活性的菌株均是在淡水或者添加NaCl不超过10‰的环境下筛选的（李鑫玲等，2011；胡德朋等，2008；刘秀花等，2006；黄鹭强等，2010；Akanbi et al，2010；魏涛等，2011；陈林林等，2010；刘秀花等，2006；Eltayib et al，2010），尽管这些菌株也存在一定的产脂肪酶活性，但其对海水环境的适应性尚未见报道。海水中含有Li+、K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Sr2+、Ba2+等多种离子，存在较高渗透压，对芽孢杆菌等细菌产脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶等活性存在抑制作用（曹煜成等，2005；朱彦博等，2013），导致众多在盐度很低及不含上述离子条件下存在产脂肪酶活较高的菌株的产酶活性大大降低甚至消失。从菌株LD-1302的16S rDNA序列系统发育树可知，虽然菌株LD-1302与Genbank中其他菌株的同源性均为99.9%，却没有明显地高度聚为一支，由此我们推断菌株LD-1302很可能为海南热带海洋环境中的地衣芽孢杆菌菌株，比目前常用的芽孢杆菌对热带海水环境具有更强的适应能力。这可能是在长期的历史进化过程中，海南独特的热带沿海地理环境形成了独特的微生物细菌地理种群。
橄榄油的主要成分为棕榈酸C16H32O2、亚油酸C18H32O2、油酸C18H34O2、硬脂酸C18H36O2等的甘油三酯（汤富彬等，2013），菌株LD-1302产生的脂肪酶可将这些甘油三酯分解为C16-C18的游离高级脂肪酸，这些游离高级脂肪酸不溶于水浮于水的表面形成絮凝状乳白色蜡样物质，这是菌株LD-1302发酵24 h后在三角瓶中产生的浮于培养基表面的絮凝状乳白色蜡样物质的原因，随着发酵时间的延长，这些絮凝状乳白色蜡样高级脂肪酸的混合物逐渐消失，推测菌株LD-1302除了产脂肪酶外，还可能产生烃类水解酶等其它酶类，将絮凝状乳白色蜡样物质分解为水溶性物质或小分子气体。石油是一类以C6-C20的烷烃、环烷烃、芳香烃类为主的油质，近年来，我国海面溢油与深海溢油事件时有发生，这严重破坏了海洋生态环境，一定程度上制约了海洋经济的可持续健康发展（马丽等，2013；廖国祥等，2011；杨建强等，2011），而微生物修复技术因高效安全、环境友好、无二次污染等优势，被逐渐应用于修复溢油、深海水产养殖等造成的海洋环境污染（王丽娜等，2013；郑天凌等，2001），所以菌株LD-1302很可能对被石油污染的热带海洋环境存在较好的修复作用，当然，这还有待进一步的深入研究。
产脂肪酶地衣芽孢杆菌LD-1302筛选、培养基及产酶条件研究（一）
产脂肪酶地衣芽孢杆菌LD-1302筛选、培养基及产酶条件研究（二）
产脂肪酶地衣芽孢杆菌LD-1302筛选、培养基及产酶条件研究（三）
产脂肪酶地衣芽孢杆菌LD-1302筛选、培养基及产酶条件研究（四）
产脂肪酶地衣芽孢杆菌LD-1302筛选、培养基及产酶条件研究（五）