制药废水生化处理过程中硝化菌分离筛选、生长曲线的测定（一）
在全面控制污染物排放专项整治行动中，原料药制造行业属于十大重点行业之一，制药（抗生素、维生素）行业需严格控制其废水污染物排放。制药废水因污染物质组分复杂，氨氮含量高，且包含有生物抑制物、有毒有害物质而难以被微生物自然降解，因此抗生素类制药废水的处理是一个棘手问题。在制药废水生化处理过程中，脱氮菌是影响生物脱氮效果的关键因素，发掘新型的高效脱氮菌对生物脱氮技术在废水处理中的运用具有十分重要的意义。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
1.1.1实验仪器
LDZM-80KCS压力灭菌器，上海申安医疗器械厂；VS-1900净化工作台，苏州市金净净化设备科技有限公司；Applied Biosystems 2720热循环仪，美国赛默飞世尔公司；GWA-UN4-F20超纯水器，北京普析通用仪器有限公司；FR980凝胶成像仪，上海复日科技仪器有限公司；TH2-C恒温摇床，太仓市实验设备厂；FE28型酸度计，瑞士梅特勒-托利多公司；Applied Biosystems 3730XL测序仪，美国赛默飞世尔公司；DT5-6A离心机，北京时代北利离心机有限公司；SHH-250L生化培养箱，重庆康城永生试验设备有限公司；微生物生长动态监测系统,丹麦Biosense公司。
1.1.2试剂
NaCl、MgSO4·7H2O、Na2CO3、CaCO3和NaH2PO4，AR级，成都市科隆化学品有限公司；K2HPO4、KH2PO4、CH3COONa、(NH4)2SO4和MnSO4·H2O，AR级，西陇科学股份有限公司；FeSO4·7H2O、NH4Cl，AR级，国药集团化学试剂有限公司；无水葡萄糖，AR级，中国惠兴生化试剂有限公司。
1.2样品与培养基
1.2.1样品来源
活性污泥样品采集自湖北省宜昌市三峡制药有限公司生化池。使用前先用纯化水进行清洗处理：用250 mL烧杯装入一半容积的污泥，加入等体积纯化水后，玻璃棒搅拌1 min，静置沉降30 min，去除上层水洗液，重复3次后备用。同时取样进行宏基因测序，分析目标样品内微生物结构丰度。
1.2.2培养基
（1）富集培养基。富集培养基A：NH4Cl 0.8 g、NaNO20.5 g、KH2PO44.0 g、MgSO4·7H2O 0.4 g和Na2CO30.8 g，加水2 000 mL，pH 7.4，121℃高温灭菌15 min。富集培养基B：NaNO22 g、NaCl 1 g、K2HPO41 g、MgSO4·7H2O 1 g、FeSO40.8 g和Na2CO32 g，加水2 000 mL，pH 7.8，121℃高温灭菌15 min。
（3）硝化培养基培养基。NH4Cl 0.4 g、NaCl 0.12 g、K2HPO40.2 g、CH3COONa 2 g、MgSO40.05 g、MnSO40.01 g和FeSO40.01 g，加水1 000 mL，调节pH值7.2，添加18 g/L的琼脂，121℃高温灭菌15 min。
（4）反硝化培养基。NaNO20.05 g、NaCl 3 g、KH2PO42 g、CH3COONa 1 g、NaH2PO43 g和无水葡萄糖10 g，加水1 000 mL，调节pH值7.2，添加18 g/L的琼脂，121℃高温灭菌15 min。
1.3硝化菌富集培养及硝化菌分离
取经过前处理的活性污泥20 mL分别加入装有100 mL无菌富集培养基的250 mL三角瓶中。30℃、180 r/min恒温摇床中富集培养72 h；转接后，再次富集。将富集液进行梯度稀释（10-2～10-4）后，分别涂布于、硝化和反硝化固体培养基上，30℃恒温培养至出现明显单菌落。
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