Bact/Alert 3D血培养仪原理、报阳时间与生长曲线测定
目的观察Bact/Alert 3D血培养仪报阳时间及生长曲线，帮助做出正确的血培养初级报告及预测细菌的类型。方法对本院656例成人血培养报阳时间及生长曲线进行分析。结果肠杆菌科的细菌、葡萄球菌、非发酵菌、链球菌和肠球菌、念珠菌及布鲁菌报阳时间依次延长，生长曲线各有特点。结论根据各类细菌在Bact/Alert 3D血培养仪中报阳时间及生长曲线特点，帮助做出正确的血培养初级报告及预测细菌的类型，协助临床医生快速准确经验用药。
随着血培养对临床帮助越来越大，血培养送检率也越来越高，但血培养结果回报太慢是临床医生对血培养满意度最低之处。Bact/Alert 3D血培养仪报阳时间与生长曲线帮助微生物实验室做出正确的血培养初级报告及预测细菌的类型，在一定程度上提高了医生对血培养的满意度。
材料与方法
1.1标本来源2014年1月-2015年12月期间我院在Bact/Alert 3D血培养仪上报阳656例血培养标本。
1.2仪器与试剂法国梅里埃Bact/Alert 3D血培养仪，成人中和抗生素需氧瓶；采用VITEK-2全自动微生物分析系统进行细菌鉴定和药敏试验。
1.3方法按临床检验操作规程无菌采集左右手各8ml左右静脉血注入成人中和抗生素需氧瓶中（由于没有培养厌氧菌的能力与经济条件，我院只能实行‘一侧一中和抗生素需氧瓶’的方案），立即送至微生物室放入Bact/Alert 3D血培养仪进行培养。仪器报阳时，先查阅阳性瓶的报阳时间及生长曲线并做好记录，接种转种血平板和巧克力平板、麦康凯平板、沙堡弱平板，并做革兰染色与湿片（看动力），出初级报告，如“检出革兰阳性球菌可能是葡萄球菌”或者“检出革兰阴性杆菌可能是肠杆菌科的细菌或者非发酵菌”、“检出真菌孢子可能是念珠菌”。次日早上上班立即查看平板做快速、简单的鉴定，出二级报告，同时快速配好菌液上VITEK-2细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药敏试验，下午下班前就可以出最终报告。
2结果
2.1报阳时间656例报阳标本中，肠杆菌科的细菌262例，占40%；葡萄球菌223株，占34%；非发酵菌79株，占12%；链球菌52株，占8%；念珠菌20株，占3%；布鲁菌7株，占1%；假阳性13株，占2%。其报阳时间见表1。
报阳时间656例报阳标本中，肠杆菌科的细菌262例，占40%；葡萄球菌223株，占34%；非发酵菌79株，占12%；链球菌52株，占8%；念珠菌20株，占3%；布鲁菌7株，占1%；假阳性13株，占2%。其报阳时间见表1。
表1各类微生物报阳时间
2.2各类微生物在Bact/Alert 3D血培养仪上生长曲线特点见图1、图2。
图1各类微生物的生长曲线
3讨论
图2用过抗生素的生长曲线
Bact/Alert 3D血培养仪原理是当培养瓶内有微生物生长，代谢过程中产生的二氧化碳可通过半透膜渗透至瓶底，与固定于瓶底的感应器结合，指示剂产生颜色变化，经光电检测得知二氧化碳变化情况，自动连续记忆并且制成生长曲线图，计算机接受此信息后，以加速度、起始值、速率三种方式来判断阳性与否[1]。具体的程序是仪器每10min检测瓶底颜色的变化，已测定二氧化碳的绝对浓度达到3300反射光度或加速度达到32反射光度每10min，系统判断阳性[2]。由于血量、菌量、抗生素的使用及接种标本时间等因素都会影响血培养生长曲线，本文只能选择典型的生长曲线进行分析，不是很全面。
肠杆菌科报阳时间最短，而生长曲线的迟缓期短，对数期十分迅速，平稳期极短，有时甚至看不到并且其二氧化碳的绝对浓度都在4000反射光度以上。其形成上述特点是由于此类细菌一般为兼性厌氧，在对营养条件要求不高，生长期短，细菌繁殖快，发酵葡萄糖产酸且产气，二氧化碳产生速度快而量多[3]。这些报阳的肠杆菌科细菌中有一例特别的生长曲线见图二，虽然这例五天报阳时间，但是其对数期十分迅速。出现这种生长曲线的原因是患者在抽血培养前就使用过抗生素。
葡萄球菌报阳速度仅次于肠杆菌科细菌，生长曲线有一定的倾斜，图形的迟缓期、生长期、稳定期都明显可见。其形成上述特点是因为葡萄球菌为需氧或兼性厌氧，虽其对营养要求不高，在肉汤中生长迅速，但对碳水化合物的发酵反应不规则分解葡萄糖产酸[4]，所以二氧化碳的生产量与速度都不如肠杆菌科细菌。
发酵菌报阳时间要长于葡萄球菌，生长曲线的迟缓期与稳定期比较平坦，形成一条典型的S线。其形成上述特点是由于非发酵菌一般为专性需氧菌，培养瓶由于加入血液等耗氧物质，影响细菌的生长环境，所以生长较为缓慢，其生长期较短，很快就进入稳定期；其不发酵糖类，虽能氧化葡萄糖，但产酸不产气，导致二氧化碳的生产量与增加的速度不会有明显变化，迟缓期与稳定期曲线因此较平坦[5]。
链球菌与肠球菌报阳时间与生长曲线相似，其报阳时间要长于非发酵菌，生长曲线的迟缓期与稳定期较平，生长期较陡。其形成上述特点是由于链球菌为需氧、微需氧或厌氧菌，营养要求高，在普通培养基不易生长，有些菌株还需要特殊的生长因子，对糖分解能力不定，导致其生长缓慢及二氧化碳的生长量少。肠球菌为需氧和兼性厌氧菌，对营养要求，分解糖类情况、生长速度与链球菌相似，所以其报阳时间与生长曲线与链球菌相似。这些报阳的链球菌中有一株肺炎链球菌很奇怪，培养液中菌株的革兰染色总染成革兰阴性球杆菌。有文章报道：肺炎链球菌在血培养报阳6h为革兰阴性球杆状[6]。这与肺炎链球菌自溶有关。
念珠菌的报阳时间要长于链球菌与肠球菌，整条生长曲线较圆滑，没有突出的棱角。这可能与念珠菌的繁殖方式及分解糖类物质时生长二氧化碳的能力有关[7]。
布鲁菌报阳时间最迟，大概在3d左右，生长曲线与非发酵菌相似，迟缓期与稳定期较平坦，对数期所对应的纵坐标较短。这与布鲁菌对营养要求高，生长缓慢有关。如果遇到布鲁菌此类的生长曲线，做好生物安全防护，因为其被认为潜在的生物恐怖病原菌，可以引起实验室爆发感染[8，9]。
本次研究中有13例假阳性，出现假阳性的原因可能是：⑴血培养仪的外界温度的变化；⑵电源电压不稳定；⑶血培养瓶没有常温避光保存，长时间被阳光直射；⑷细胞本身也能发酵产生CO2，在抽血量超过推荐采血量或推荐采血量下含有大量的细胞(如白血病、真红细胞增多症等疾病)的情况下会导致假阳性的出现；⑸某些原因(如酸中毒、输入大量液体)导致标本本身PH值偏酸性导致出现假阳性[10]。
通过观察Bact/Alert 3D血培养仪报阳时间及生长曲线，可以帮助实验室做正确的一级报告和预测可能的细菌类型，防止布鲁菌感染实验室工作人员，为临床用药提供更为及时、可靠的指导。