龙脑在制备沙门氏菌鞭毛抑制剂中的医用用途
龙脑(Borneol),又名冰片、2-茨醇。是由菊科艾纳香茎叶或樟科植物龙脑樟枝叶经水蒸汽蒸馏并重结晶而得,无色或白色半透明六方形结晶体,具有类似樟脑的气味。目前龙脑来源广泛,根据提取原料的不同的,龙脑还分为左旋龙脑、右旋龙脑和消旋龙脑三种旋光异构体。其天然产物同时还存在于薰衣草、迷迭香、艾叶等多种植物中,在植物挥发油中发挥重要的医药作用,还是我国传统中药艾叶挥发油中主要活性成分之一。现代医学研究表明,龙脑具有抗菌、防止血栓的形成、协助药物透过体内屏障、阵痛抗炎抗癌和脑神经保护等作用。近年来,大量文献对龙脑的药理活性进行了报道。但是,截止到目前国内外尚无龙脑抑制沙门氏菌鞭毛的相关研究。
本文提出龙脑在制备沙门氏菌鞭毛抑制剂中的医用用途,为防治沙门氏菌感染提供了新的研究思路和候选天然化合物。
沙门氏菌SL1344生长曲线
沙门氏菌SL1344接种于2mL LB培养基中过夜培养,次日按照1:100扩大培养至100mL锥形瓶继续培养至OD600nm
=0.3时,将菌液等量分装至5个锥形瓶内,每瓶分别加入龙脑使其终浓度分别为16、32、64、128μg/mL,同时设DMSO对照组,37℃,180rpm继续培养,每隔1h测定细菌培养物OD600nm
值并记录,直至细菌生长至平台期,绘制生长曲线。
结果表明:在有效浓度范围内(16-128μg/mL),龙脑均不影响沙门氏菌SL1344的生长(见附图)。
龙脑抑制沙门氏菌SL1344对Caco-2细胞的粘附
将消化下的Caco-2细胞接种于24孔培养板中,用不含抗生素的DMEM培养基调整浓度为4×104
cells/孔,继续置于37℃的含5%二氧化碳培养箱培养过夜。沙门氏菌SL1344接种于2mL LB培养基中过夜培养,次日,按照1:20扩培至新鲜LB培养基,同时分别加入龙脑使其终浓度分别16、32、64、128μg/mL,并设置等体积DMSO对照。在37℃,180rpm继续培养4h。调整菌液的浓度至4.0×106
CFUs/mL,备用。
移去24孔板中的培养基,加入上述准备好的菌液,1mL/孔。感染1h后,每孔加入1mL0.2%的TritonX-100,反复吹打。将裂解液转移至离心管,倍比稀释,涂布于链霉素抗性LB固体培养基于37℃过夜培养,次日计数。
结果表明:龙脑(32-128μg/mL)处理能够显著抑制沙门氏菌SL1344对Caco-2细胞的粘附。