血清对兽用疫苗细胞生长情况的影响
随着社会进步、经济发展水平的提高以及人类生活质量的不断改善，人们对含蛋白质和脂肪较多的肉类的需求明显增多，带动了肉类消费的快速增长。在中国社会这一现象更加明显，根据联合国商品贸易统计数据库（UN Comtrade Database）数据，2000—2016年我国肉类进口的年均增长率为8.8%，并且在未来将进一步增长，这使得我国养殖业将面临空前的机遇。然而，目前动物疫病在世界范围不断蔓延，也使得我国养殖产业面临着极大的威胁，兽用生物制品的开发与应用就显得尤为重要。在我国，疫苗仍是主要的兽用生物制品，在预防各类动物疾病中起着重要作用，所以要通过不断的探索来提高疫苗质量，从而更好地为人类社会创造更多的价值。在疫苗的生产过程中越来越多的应用到细胞培养技术，而在漫漫人类历史长河之中，细胞培养也只不过经历了短短六、七十年的时间，却给人类创造了无限的可能，为许多的生物科学的开展起到了推动作用，现已成为研究领域里一大热点。细胞的体外培养条件要求很高，温度、气压、缓冲环境、营养、pH值等都会影响到细胞的生长。
在西藏自治区兽医生物药品制造厂的小反刍兽疫活疫苗（Clone 9株）生产过程中也涉及细胞培养过程，此次研究旨在探索细胞生长过程中血清对其生长的影响以及最适宜生产过程的血清比例，以期为兽用疫苗生产中的细胞培养提供科学依据和理论参考。
一、材料与方法
1.地理位置。西藏自治区位于我国西南边陲，是五个少数民族自治区之一，地处北纬26.50至36.53，东经78.25至99.06之间，平均海拔4000米以上，素有“世界屋脊”之称。拉萨则是其首府，位于西藏高原的中部，喜马拉雅山脉北侧，海拔3650米，地处雅鲁藏布江支流拉萨河中游河谷平原，全年多晴朗天气，降雨稀少，全年日照时间在3000小时以上。
实验室位于拉萨北郊西藏自治区兽医生物药品制造厂厂区，实验室内配备生物安全柜、超净工作台、CO2培养箱、高压灭菌锅、倒置显微镜以及满足实验的基本材料和无菌环境。
图1细胞生长随血清比例增加的生长情况
2.研究方法。实验材料均来自西藏自治区兽医生物药品制造厂，于2017年4月开始准备。提前制造实验室无菌环境，选取7个25毫升克式瓶作为传代容器备用，并标记好所用细胞种类及细胞代次、传代时间、血清比例，此次用于传代的细胞为DBN细胞F22，血清种类为马血清，血清比例依次为0.15毫升（1%）、0.3毫升（2%）、0.45毫升（3%）、0.6毫升（4%）、0.75毫升（5%）、0.9毫升（6%）、1.05毫升（7%）。在超净工作台中进行传代工作，并将克式瓶移至CO2培养箱进行培养及观察。
3.数据记录与分析。从4月17日开始观察细胞生长情况并如实记录，记录结果如表1。为方便比较数据之间的差异，特将实验观察结果表述为较差、差、良好三种情况，并记录为表2。使用Microsoft excel 2010软件处理数据，以时间为横坐标，细胞生长情况为纵坐标，用图表工具中的柱状图对血清比例与细胞生长之间的相互关系进行分析，并作图（图1）。
表1各营养液梯度细胞生长情况
表2细胞生长随血清比例增加的生长情况
二、结果分析
经数据处理，并做出简略柱状图来表示细胞生长情况与血清浓度之间的相互关系。由图表可知，在此次实验中，随着血清比例的增加细胞生长情况逐渐变好，而且细胞数量依次增加。同一环境下，血清浓度对细胞生长情况的影响呈现出先增加后减弱的抛物线状现象。
三、讨论与结论
本次实验观察是从细胞培养后的第三天开始的，主要是因为在小反刍兽疫活疫苗的细胞培养周期为6日，本次实验结论定为最适血清4%～6%是根据抛物线轴对称特性，故将5%血清定为适宜细胞生长的条件。
通过对实验数据的观察分析可以发现，此次实验中细胞的生长对血清的依赖度还是较大的，低浓度下对细胞存在抑制作用，而高浓度血清条件下可促进细胞的生长。但作为疫苗生产中的细胞培养过程，并不是血清浓度越高越好，从数据中可以看出，血清浓度到达一定高度后使得细胞生长过量，影响细胞生长情况的观察。因此，为更好地配合生产需求以及节约成本考虑，细胞培养中加入4%～6%的血清量最为合适。
相关新闻推荐
3、微生物生长动态监测系统的应用：研究β-内酰胺类抗生素对丝状化的诱导能力